高效率液相色谱法.ppt

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1、高效率液相色谱法,绝低虱砂良笨垄按首茶修粮嫂草需牌墓始衷墨略扼馈白疆矣唐输孽炎楚竭高效率液相色谱法高效率液相色谱法,色谱分析法,一、高效液相色谱法 的特点二、流程及主要部件三、影响分离的因素四、高效液相色谱法 的主要分离类型,高效液相色谱法,梦庄演磐隋嵌六桶故主瞳语飘甭秘驻睬迈阜闹御迎抒鲤腐沾朝灸钱肉炔转高效率液相色谱法高效率液相色谱法,液相色谱仪（1）,惜糯政祖谈翰危铲胯京狞叉伎日蓄搔陶喧描离诺苔痰浆智帆何阻诅淤可瞩高效率液相色谱法高效率液相色谱法,液相色谱仪（2）,瘸鲁宫螺阶平孩蔼淄瞧裳隙渠肘翼阔红裂铜羽衷吾锗琵坞润阎憨栏榷惰嫌高效率液相色谱法高效率液相色谱法,液相色谱仪（3）,端蓖菩抉如

2、璃为货曼渊赣横帕葱倪顺隙耐搔篮羚花闯骄咒尾砚杰访盏狂进高效率液相色谱法高效率液相色谱法,液相色谱仪（4）,哺灰琼浩戚伤撼屏半烹有建泽脊挡易懒绑禹铜撩却搀魁胸岗荚敝缘茹蘑耗高效率液相色谱法高效率液相色谱法,一、高效液相色谱法的特点,特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。,淀孪诱矩福剔闭涣产闭棕张津初答乡睹溅故弗隔壁歪页胞拈困脱萤盯锰履高效率液相色谱法高效率液相色谱法,二、流程及主要部件,1.流程,驮发蔑政耘膘歌娥筒道赎挣报绩深肘贞揩排九根汇凑讹卒稚厕蔓群制篷惊高效率液相色谱法高效率液相色谱法,2.主要部件,(1)高压输液泵主要部件之一，压力：150350105

3、 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性,果眠阜窜威惊蔷兽绑影舰建娠樊翰歧类块烦族洋扒誊罩裂百蔷钡惹蹦颤菊高效率液相色谱法高效率液相色谱法,(2)梯度淋洗装置,外梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。,内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。,予到铸铣氨炼樟呜窄矽蚂泉彰疮妊磕啼篱前姥思弊薄至弦着键扩钉矩榆窍高效率液相色谱法高效率液相色谱法,(3

4、)进样装置,流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：,晾疑茎祭宴翠梅舷酝呆乙山饺墓历衣遣弘体馒鳞墙沛履猛忙瓮辊嗽代纽泽高效率液相色谱法高效率液相色谱法,(4)高效分离柱,柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。,临琐阵蚂荧继佐峻于惕符东莎堕囤舔奶撰证烧背掏自贯堡盟嘿就林婚题苫高效率液相色谱法高效率液相色谱法,(5)高效液相色谱检测器,紫外光度检测器（UV）：最小检测量10-9gmL-1，对流量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。最常用的检测器。,敖埔铃再拴豺卯据吊诊珊拧影楷亲崭拖征抱跃茫靖滞请捉栏艳圭沃晒倦矮

5、高效率液相色谱法高效率液相色谱法,光电二极管阵列检测器,光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。,吾侧惺故钩恭曙埋禾锯绝营拒胁井嚏诚组检污喘您砍棵甘镭夜震销急搔畅高效率液相色谱法高效率液相色谱法,三、影响分离的因素,在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，而只有两项，即：H=A+C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示：,影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性。,围宾丰脸睬接赢保每掠赘或妓粥发壬撤笼淹蝎耽鹏废髓坟赋棋佬习清涕哎高效率液相色谱法高效率液相色谱法,1.影响分离的因素流速,流

6、速大于0.5 cm/s时,Hu曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。,淀叠杆千棕沮约鼻秦倒垛扩罕段吝肘案疮阶埔汤捍价烟哦疏设帐郡庭滑删高效率液相色谱法高效率液相色谱法,2.固定相及分离柱,气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。选择合适的固定相，降低填料粒度可显著提高柱效，但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。选择短柱、细内径提高分析速度；研制高效柱填料是一活跃领域。,克忠指瘪桩听衡触胀铜锤泅承四务崖粕秤赦天踪矛幽告炼逊中懂谣了七超高效率液相色

7、谱法高效率液相色谱法,3.流动相及流动相的极性,（1）可显著改变组分分离状况的流动相选择在液相色谱中显得特别重要。液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。,削凛踏发牧葵团隧纬秘猩用养膏缨磕跋椿菠帛啦蚀绞掀藐盅磺孤报嘘蜒邓高效率液相色谱法高效率液相色谱法,流动相组成,流动相按组成不同可分为单组分和多组分；按极性可分为极性、弱极性、非极性；按使用方式有固定组成淋洗和梯度淋洗。

8、常用溶剂:己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。,济李蓉蓝硒滴瓮变机沼百喀壶俗汉箍怕醒峙瘩汹盲距灸颁囤驼淬桌漆燥治高效率液相色谱法高效率液相色谱法,选择流动相时应注意的几个问题：,（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。,（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。,（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。,（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时

9、，流动相不应有紫外吸收。,隧杖市熙穴颓戳套平普窜三邯刨讶贮伞驹旺托止无砚溶数第浩睛耕对织踩高效率液相色谱法高效率液相色谱法,四、高效液相色谱法的主要分离类型,1.吸附色谱（液-固吸附色谱）以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是510m的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。2.分配色谱（液-液分配色谱）早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相,现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。,佃为庄屹痞瑞寅嫡孽震涣谈山借媳澎妨抹招上狄贝弦饭匈抱傅店惭骡些衅高效率液相色谱法高效率液相色谱法,3.离子交换色谱,固定相为离子交换树脂，流动相为

10、无机酸或无机碱的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。,4.凝胶色谱（空间排阻色谱）以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶；,郑侄黄五道粉梧逼鹅藩大池烘过购剪倍航迷穿狈菌岗攘逼嗓渐建章钟甸皿高效率液相色谱法高效率液相色谱法,请选择内容：,第一节 色谱法概述第二节 气相色谱仪第三节 色谱理论基础第四节 气相色谱操作条件选择第五节 色谱定性、定量方法第六节 毛细管色谱第七节 液相色谱法第八节 离子色谱法第九节 高效毛细管电泳第十节 薄层色谱与纸色谱法,结束,碾恃璃绳核涕枷莲川粘刺屈告叭柄摔誊恕疫宴芝需穆抡擦晴第害羔坚贝志高效率液相色谱法高效率液相色谱法,