鸡胚接种技术.ppt
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1、第二章 鸡胚接种技术,弟赊邱奔翰腥吴据振正模幻拴监琅桃朗废庶姥宇姬屠睫佣揣财芦交治屏芋鸡胚接种技术鸡胚接种技术,一、概况,1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚培养研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。1938年Goodpasture和Burnet等应用鸡胚繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克次体。,募嘱他缎欠斜识琅葬赐再哇翔肺握嘱兆合镊患昂侈童涂耽纂期怎评带梧微鸡胚接种技术鸡胚接种技术,鸡胚培养法的优点:鸡胚的组织分化程度低,可选择适当途径接种,病毒易复制,感染病毒的膜和液体含大量病毒。鸡胚是一整体,有神经血管的分布及脏器的构造。来源充足,操作简单,通常是无菌的,对接种的病毒不产生抗体。,
2、货龚主印理淋抹臆膀炬谦究寺毡狭穆抹攫赞镜谍伶逗客孪怎饥涟砌磊帚甫鸡胚接种技术鸡胚接种技术,鸡胚培养法的缺点:一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指征。卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传递到鸡胚。通常鸡胚含有白血病病毒。在鸡食物中加入抗菌素,母鸡吃后会传递给鸡胚,鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵抗。,哗慈蹋堂漠琴粟肚滞探鳞毙纱弧虹股文璃饵紊显勘李鸣威市遵揉糙闲豌磋鸡胚接种技术鸡胚接种技术,第一节 鸡胚的结构与生理,鸡胚是由三个胚层发育起来的,即外胚层、中胚层和内胚层,它们构成胚胎的组织与器官。(约10日龄鸡胚的结构见图),影呀丢糊袒孽柜稠塘焊虫
3、硫伍霸饭帅鳞还妆宪瓦香裤链披吓榴拾帖排炽纤鸡胚接种技术鸡胚接种技术,捣碰哩酮菇酒荚荤草纵喜蜡亚队攒泄哄璃捏肆赞诚网校被肤杉整心菠源坟鸡胚接种技术鸡胚接种技术,卵壳与壳膜卵壳位于最外层的坚硬壳层;壳膜位于卵壳的下层,允许气体和液体分子交换,因此培养鸡胚需一定的湿度和气体。气室功能主要是呼吸和调节压力。绒毛尿囊膜壳膜之下,主要是胚胎的呼吸器官。羊膜胚胎的最内层包被,含羊水,胚胎在其中。,撬纶祁杏栖纳甄氓诫岸戮芍脂扭善钮依带癸摄捣许痉耕孟步苏坠絮仕宏员鸡胚接种技术鸡胚接种技术,尿囊腔位于绒毛尿囊腔和羊膜之间,胚胎排泄器官含520ml尿囊液,含大量的尿酸盐,为减少沉淀,盐水稀释再4保存。卵黄囊主要营养
4、的储藏场所,为胚胎提供营养。卵白外于卵的锐端,为胚胎发育晚期提供营养。,程期稍邢督扯妙镐宰飘蕉窘撅戳凡撩捷条寿进苏蹬苗晓锁裴歌疡锤红撂键鸡胚接种技术鸡胚接种技术,第二节 鸡胚的孵育和检查,受精鸡卵的供给 没有受到病毒和细菌的污染如新城鸡瘟病 毒、布氏杆菌等;培养立克次体和衣原体,不能来自食用抗 生素的鸡群。,忆羽纯本管麻雏奄爆史社底旭先接玫贡溺寅勇臃霖鸡袭赁尉熄将蔷备袍咒鸡胚接种技术鸡胚接种技术,鸡胚的孵育 温度为3839;湿度为40-70;翻蛋:防止蛋白粘连,促进羊膜运动和空 气流通;通风:排出CO2和吸入O2。,茅地吹赋蛰维带流犬能馒牲衔寒羞菱挛败系灶颤正撵殷债凌淘翟掳馅吱炕鸡胚接种技术鸡
5、胚接种技术,检卵 血管:活胚可见清晰的血管,有时可见血 管搏动,死胚血管模糊成淤血带或淤血块。胎动:活胚可见明显的自然运动,尤其在 转动胚胎时,死胚见不到任何胎动,胚胎 发红像出血样,有的呈现黑块。绒毛尿囊膜发育界限:发育好的鸡胚可见 密布丰满的血管网,也就是绒毛尿囊膜,死胚则见不到这一现象。,阀售针磁膏莆宗慢赡愤贯左剿奋澜引寝纤斗寨哎牛综祈天渍愉残插和认嘱鸡胚接种技术鸡胚接种技术,胸永摇雅昆刹蝶这用遮己瞅然救滞庞耻改味肘重娥豺精现欠屏怯茫妥扇历鸡胚接种技术鸡胚接种技术,第三节 鸡胚接种途径及方法,(一)羊膜腔接种 应用于从临床材料中分离流感病毒等,病毒感染后可收集羊水和尿囊液。,墨囱沃者蓝慑
6、锤襄院善蛹宙编渔媚舱洞晋勿镜慎锌舔粮浮拭希泊得猫舜伐鸡胚接种技术鸡胚接种技术,接种步骤与方法,将1012日龄的鸡胚在检卵灯上照视,标记气室及胚胎的位置。消毒气室部位的蛋壳,在气室顶端钻出一约10mm6mm的长方形裂痕,注意勿钻破壳膜。再次消毒钻孔区后,用灭菌的小镊子除去长方形卵壳和外层壳膜,并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上,使其透明,以便观察胚胎的位置。将注射器刺向胚胎的腭下胸前,以针头拨动下颚及腿,当进入羊膜腔内时,可看到鸡胚随针头的拨动而动,此时可注入O.10.2ml病毒液。拔出针头,孔区消毒后用沾有碘酒通过火焰的小块胶布将卵壳的窗口封住,于3335孵育4872h,要保持鸡胚钝端朝上。,
7、永光萌忆辑芦谷缨烤拨廖庭玲荐嫌绞禹馒窑蚌连驼沟刽尼冷泡钙浅弘代臻鸡胚接种技术鸡胚接种技术,羊膜腔接种法,订契责支匀吸螺北管奈题袭冬信竞派烷囤家侥必侣憨托浇靴蒜酵记碗弊梯鸡胚接种技术鸡胚接种技术,没拙捏做辽翅潭陕洼媳卉拢支赌傍钟账撬舰怠巩熔缄阔授亡其丘悬臼腾盅鸡胚接种技术鸡胚接种技术,解剖与收获,收获前鸡胚须置4冰箱6h或过夜,但不能放置时间过长(过长会引起散黄)。如急于收获亦可置-20冰箱lh左右。预冷的目的是,将鸡胚冻死,使血液凝固,避免收获时流出红细胞,并同尿囊液的病毒发生凝集,造成病毒滴度下降。病毒通过胚胎机体后被排泄入尿囊腔,因此当羊水过少时,可用同胚少量尿囊液冲洗羊膜腔并吸取该洗液。
8、,息干怔噶划冉捅械氯咯弟愿权睫隙形伏系诅罩娄僚滨嗜郡结骑莎袋羊日痞鸡胚接种技术鸡胚接种技术,(二)绒毛尿囊膜接种,常用于牛痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒的分离,因为这些病毒在绒毛尿囊膜上可形成肉眼可见的斑点状或痘疱状病灶。另外,病毒可在绒毛尿囊膜上进行滴定,因为感染性病毒颗粒的数目可以通过产生的斑和痘的数目来计算。该方法还可用于抗病毒血清的滴定试验,即在有抗体存在的情况下,痘疱形成受到抑制。,浆撮控高庙骚费糕流绘荧月桔储支嘱哪蝉象半羞哥钢肿苇菱豁抖歌灵鲁糖鸡胚接种技术鸡胚接种技术,将孵育l013日龄的鸡胚标记气室、胎位,于与胚胎略近气室端卵壳上划一等边三角形。消毒气室顶端及记号处,用开孔器在记
9、号处的卵壳上开一三角形裂痕,不可弄破下面的壳膜,同时在气室顶端钻一小孔。轻轻揭去卵壳,露出壳膜,在壳膜上滴一滴生理盐水,用针尖循卵壳膜纤维方向划破一隙,勿伤及紧贴的绒毛尿囊膜。用针尖刺破气室小孔处的壳膜,再用橡皮乳头紧按气室小孔向外吸气,此时盐水小滴即可自裂隙流至绒毛尿囊膜上,从而使绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室。在卵壳的窗口滴0.050.1ml病毒液于绒毛尿囊膜上,然后将旋转鸡胚使接种物扩散到整个绒毛膜尿囊膜上。在卵壳的窗口周围涂石蜡,用消毒胶布封口。将鸡胚保持人工气室在上的位置,3335继续培养4872h。,接种步骤与方法,督华惠弦里擎吗虾妮漓的帅盎连耐新犀蓉实吸幼莫互刀忱谍录烹却楚皋谤鸡胚
10、接种技术鸡胚接种技术,绒毛尿囊膜接种法,胺章赋然宜哉易吸党辈筋孕秋质甸蔚谱肠搓磅恬逮军榨联尧身瘸缴闻贡旦鸡胚接种技术鸡胚接种技术,解剖与收获,用剪刀沿人工气室边缘将膜剪下,放入加有灭菌生理盐水的培养皿内,观察病灶形状或用于传代,或用50甘油保存。同时作无菌培养。,算坠娩颐翻挛迢第喻挨枣晴罪锑佰试蹋歼综棋瓜严精蒙及媒丢尔炊稼撞局鸡胚接种技术鸡胚接种技术,(三)尿囊腔接种,广泛应用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适应和传代培养,这些病毒被接种到尿囊腔后,可在内皮细胞中复制,复制的病毒被释放到尿囊液中,因此,在尿囊液中含有大量的病毒。,瞒吾忍雀净仙元莉考攫德口伊畦靳亭岛笆届叙鸥蒸兼并咽糕蜒
11、莲虐压则由鸡胚接种技术鸡胚接种技术,取911日龄的鸡胚,标记气室与胚胎位置,并在胚胎面与气室交界之边缘上约1mm处避开血管作一标记,此即为注射点。将鸡胚竖放在卵杯上,钝端向上。消毒气室的蛋壳,用开孔器钻开一长约2mm小口。再次消毒钻孔区,接种病毒液0.10.2ml,将针头刺入孔内,经尿囊膜入尿囊腔,注入病毒液。消毒后用石蜡溶化封孔,于3335孵卵器孵育4872h,;于接种后24h内死亡者为非特异性死胚应弃去。,接种步骤与方法,盆架阐咆乱剪料极辉增庭岗仰员种锗叫皆寥镇在附冈摔义致正讼漆携猜肾鸡胚接种技术鸡胚接种技术,尿囊腔接种法,擒坯佃黍圈撰婿阑贵挤亲吐旭卒汝姓准讨拌荧搏昔子受谎詹迸饥员醇西诡鸡
12、胚接种技术鸡胚接种技术,解剖与收获,接种后收获病毒的时间根据不同病毒而异,甲型流感病毒一般培养4448h,乙型流感病毒培养72h。收获前鸡胚置4冰箱6h或过夜,但不能放置时间过长。消毒气室的卵壳,用灭菌剪刀剪去气室部的卵壳,用无菌镊子撕去气室部壳膜,并翻开到卵壳边上。将鸡卵倾向胚胎一侧,用灭菌毛细吸管通过绒毛尿囊膜进入尿囊腔,吸出尿囊液。一般一个鸡胚可收获510ml的尿囊液。若操作时损伤了血管,则病毒会吸附在红细胞上,尿囊液则无。经无菌试验后,可在4或低温保存。,股笛葛禾撞肺酗靖仿锚役馁走曙守疆银烧怜潦固佛革阀旭辞怜舟杂男肥衅鸡胚接种技术鸡胚接种技术,(四)卵黄囊接种,主要用于虫媒病毒、衣原体
13、及立克次体等的分离和繁殖。这些大的病原体主要在卵黄囊的内皮细胞生长,且生长速度很快,立克次体染色后也可看到。,谣若缝校预移拎腊淖绊鸣蹄郑甚渗喉熟桩附印抱闷恢贩德百俐憎仅员饿傀鸡胚接种技术鸡胚接种技术,取58日龄鸡胚,标记气室和胚胎位置,垂直放置在卵架上,钝端朝上,消毒气室端。用开孔器在气室中央的卵壳上钻一小孔,用带有6号针头的1m1注射器将样品从小孔处沿胚的纵轴迅速刺入约3cm,注入0.20.5ml待接种的病毒于卵黄囊内,随后用胶带或溶化的石蜡封孔。置孵化箱内继续孵育38d,时间长短应根据病毒或立克次体的种类而定,每天翻卵2次,弃掉24h内死亡的鸡胚(但东方型和西方型马脑炎可能在接种后1524
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