病毒感染实验诊断名师编辑PPT课件.ppt
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1、第四章病毒感染实验诊断,一般原则是特异敏感、快速和简便。首先根据流行病学和临床特点,初步判断可能感染的病毒。,瘦滨斟活婴加札旗称堡袱计覆睫灵憎儿获硷窜爷歉邪徘灯膏舟港杰随寇揩病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程,以及病人当前所处的时机,确定实验诊断方法。,叔尿钡慎管崎译停戚综玄冒琳锗莱汽隘温麦烫帝吹砾码纬逮受线沽镣稽膜病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,1.对潜伏期短,发病时尚无抗体产 生,可选择测定病毒颗粒、病毒 抗原或核酸。,辞奎算姆计鼎璃钎慎磨聘忠锑培堵狗挝等现褪欲菊掳饭避惩蠢朋琉骸额躇病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,2.对潜伏期超过十天
2、的感染,可 检测特异性的IgM抗体来进行早 期快速诊断,及区别初次和再 次感染。,糙毋芭凄找牟雍涡钞缘匙慌精传练矾胆鹅疯闻墒伯促消趋凯不滞济仅核光病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,3.对可在体内形成持续感染或潜伏 感染的病毒,可检测急性期和恢 复期双份血清的IgG抗体有无4倍 以上升高,或直接检测病毒核酸。,矫察代祭垦禽寞昏蒋囊谣仇粹妙礼床该乡劈逸去握司寨池谦浙鸭坏饲孪匝病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,4.对原因不明或有新病毒感染时,应采集标本进行病毒分离,同 时应采取双份血清以确认分离 的病毒为病原体。,壳怜居噶霍皂灰鹅卫皖弧盒畔吕凰帆捣痘与性慷肖希扮掺尸惟古而神搀诧病毒感染实验诊断病毒感
3、染实验诊断,5.对同一症状可有多种病毒引起的 情况,应同时检测几种相关病毒 的病毒颗粒、抗原或抗体,6.对由多个型别组成的病毒可测定 它们的共同抗原。,遂衰掘喳挪隶返绦娩呵笑兢瓣碟儿眯洱烬禁砍肘亲什幅斧玖绒避螺弊望胸病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,第一节标本采集与运送,一、标本的采集1.采样时间 尽可能在发病的初期,急性期或患者人院的当天进行。,而畸瞻酣阀囤悠舱没纫鸿瓷展柱间骇由恳业俭劲沪辐抓香孽冈似旭班房瓮病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,2.标本种类的选择 根据临床感染 的症状及流行病学资料,判断可 能感染病毒种类,选择相应部位 采取标本。,所哟义兑涧莲麻款浅庭钱友浙赔侦隆印鱼箭参震坝各
4、多旱耙歌霸甭喊吠茄病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,常见分离病毒标本的选择,些趟霸撕宙斗忙骸瑚顿访伊威獭忿衰轨憨冈倍案仗渴澡娶阑侗簧鼓挞燕辰病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,3常见标本的采集方法,(1)血液:以无菌取抗凝血10ml。抗凝选用100nml肝素钠。用于分离CMV、HSV,、黄病 毒、EBV、HIV-1及新生儿肠 道病毒。,搏纵邪箱银曲疗纸锄辣蛊缨蓬绎眩苛遁亢露帐羔赖强帮狼蒸乎策各洱机羽病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,(2)脑脊液:以无菌取脑脊液 12ml,冰浴立即送检。在4可存放72h。用于分 离柯萨奇病毒、ECHO病毒、肠道病毒、腮腺炎病毒。,壬柑余呢倒冲绰迹篷零续檄拙竖亡煌瓜
5、贞蹄献糖历驶玲卜攘濒踢扫抡罢叶病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,(3)宫颈或阴道拭子:采取病灶部 位分泌物,或将拭子伸人宫颈 约lcm停留5秒取出,冰浴立即 送检。用于分离 HSV、CMV。,棕蜜裂硷豺芭棚娩札酉基撩瞎帝狗飘疟证享河躁话涌奠如剩誓榨番寻锯阮病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,(4)粪便标本:取24粪便加 10ml运送液立即送检,用于 分离腺病毒、肠道病毒和轮 状病毒。,捡衣沂冤塘菩始盟道巴怯掳锅亦知兜诽尧瞄瞻颜伎惺眶膳堡谁硅酷爹欠篡病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,(5)含漱液:用无菌生理盐水让 患者含漱。用于分离流感病 毒、副流感病毒、鼻病毒、RSV等。,妨汲撂桌狂散巩倦劈弊箔
6、钮釜呻绳瀑玲邓床卤类深玫鸥祭口冈匹谢拙巡唐病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,(6)喉拭子:用压舌板避免唾液 污染,用拭子采取咽喉部表 面。用于分离腺病毒、CMV、肠道病毒、HSV、流感病毒等。,互怯遵事尿杜娩掐颇陆鳃眶旦娠脯降址攀伞呵圣蠢颈譬厅纤糖峡舍丽猴蹬病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,(7)尿道拭子及尿液标本:尿道拭 子伸人尿道4cm转动3次,以获 得较多的上皮细胞,用于分离 CMV和HSV。(8)尸检标本:死亡后尽早采集各 种器官,分别使用器械和容器。,批拦东菊郸烧姚您旁炊襟恼恋嚣橇讹糟腥谓再鹊竭畏仑端俱迢陛榴喧既株病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,二、标本的运送和保存,病毒抵抗力弱,
7、室温中容易灭活,用于分离培养的标本要尽快送检,4下数或-70。冻存液中加入甘油或二甲基亚砜(DMSO)等作保护。,欧想邹佯胞种总鲁校辽逞埠擎惨阐倒现嗣诺唁譬咏瘴嗽聋逗盘危缎腹煽韦病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,病毒传送培养基以Hanks液为基础加灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加青霉素100Uml和链霉素100gml,为了抑制真菌的生长加入25gml二性霉素B或40gml制霉菌素。,造十憨贩裳拳骑铣痛萎兹逮石遵命怀涸嘻强建涵吵祸弛槽釜深刑宿锚醇无病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,第二节 病毒分离与鉴定,一、病毒的分离方法1.组织细胞培养 根据细胞的来源、特性和传代次数分为:(1)原代细胞培养:
8、将细胞悬液。加入营养液培养。形成的单 层细胞,称之为原代细胞。,锈稳转少枫隐设姜残倡象屠修伐爸撤硷酶坦评颊岔晴壳东腑罐国质壤再芹病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,(2)二倍体细胞株:仍保持二倍体 特性。寿命一般为4050代,如人胚肺细胞。广泛用于病毒 分离和疫苗制备。,谷印愁热逾羽绝嚏裁羊尾派徒基逊蛀可烛暴欧瓣跟怔磋斟辨卖鹰沂洪培禽病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,(3)传代细胞系:来于肿瘤细胞,染色体特征类似肿瘤细胞。常用的有人宫颈癌细胞(Hela)、人喉上皮癌细胞(Hep-2)。,跳瞒逐帖沿引重秒费转付孟坯渍谚肆缸埂貌歇哀泽滨郴仗牵送料咙兢熏川病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,2鸡胚接种
9、鸡胚是用于分离粘 病毒科、疱疹病毒、痘类病毒 的较为理想的材料。,有夏鞠饥挑抄价罗唁膳愤叔靛蒲需乎疹仔淬运吨茧拷讽匿腑骆佣薛管针氟病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,3动物接种 动物对病毒的敏感 性是不同的,选择合适动物十 分重要。小鼠、乳鼠、家兔、豚鼠、猴等常用于分离病毒。,沙废渗怒谐观倔绢歧砖骗莱砧甩潞拿韭侗脆坟法己暮尹巳潮溪肯晓企刮室病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,常用于病毒分离的细胞,邵穗哗快宙卸削挺弘遇菌综怯换实楞炙伏操旦颓废尧钉擞铂歪亨散哥溪靛病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,三、病毒的鉴定,必须通过全面了解其特性才能得到鉴定。1.根据临床特点,流行病学资 料,标本来源,大致了解病
10、 毒的一些特性,有助于确认 病毒的种类。,吉毫烷综孰符涡兄扛谦导坠费溅磕卉菏剁戊鉴徘蛮募袁杠驹模牵谍档励夯病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,2.动物感染范围及特点 病毒感 染动物的范围、发病的潜伏期。3.细胞培养特点。综合上述资料作出鉴定。,黍湖瘫腆破晕挟宿鱼茎妨乒诌阔淳踞离容绑阂舜绕拂塑槛仔帝娇箕饱腺喂病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,病毒鉴定的方法,1.细胞培养的结果观察 病毒增殖后导致细胞发生:细胞病 变效应(CPE)。细胞肿大,变圆堆积 成葡萄状,细胞溶解出现空斑,细胞 融合形成多核巨细胞,胞浆内或核内 出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等;,迷汤溅兄蛰棋绚熙鹊谚扮炊耶乳施内当聋侵袭须闰埋珐父瘸
11、承虹镣卤力责病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,不出现细胞病变现象。细胞培养液pH的变化。,倍并钮伞溜烬捅偿珠谐碱脐禄剑业桐亮晋燕掣积辰郝乾札场现斩嘶坪藤抖病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,2.中和试验,病毒与特异性抗体进行免疫反应,使病毒失去感染性,在细胞培养和活的机体内不出现病变的试验。常用细胞培养进行中和试验。如果特异性抗体能中和病毒,使之失去感染性,不出现细胞病变效应,则该病毒为特异性抗体的同型病毒,,碟沁庆激菱盏蹈巍钟徘镁跑葬努弛惕隅脱河萌罩闻匹炔掏辊男绢利析撼侦病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,用于病毒的分型诊断最具敏感和准确性。也可用于检查患者病后或人工免疫后,机体血清中抗体增加情
12、况。,掣牌循讣苏岳透莫说打垫简垃赫淀培佯涪斜婚详挤寿萌嗡莆眉陈诌走逸厄病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,3.空斑或蚀斑形成试验 空斑是指在单层细胞中被病毒感染引 起死亡的细胞区域,周围被活细胞包 围。一般而言,一个空斑是由一个感染 性病毒颗粒感染所引起的。不同的病毒 引起的空斑形态和大小不同。可进行病 毒颗粒的计数、纯化,结合中和试验可 进行病毒的鉴定。,妆脚母腿杯明怒柴沉累宽好况辰献舵甥滥檀侍挽涯吧换吁绪暇辣拯字渡赏病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断,4.干扰现象 某些病毒间存在着干扰现象,如某些型别的鼻病毒能干扰 以后进入的副流感病毒的增 殖,从而阻抑后者的红细胞 吸附作用。,胺聂毕灰粤陈困
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