茂名地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变型研究.docx
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1、茂名地区新生儿葡萄糖6磷酸脱氢酶缺乏症基因突变型研究李富,林丽琴,魏林燕,陈海玲,吴春红茂名市妇幼保健院新生儿疾病筛查中心(广东省,茂名市,525000)【基金课题】:广东省茂名市科技计划项目项目名称:茂名地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氯酎缺乏症基因突变型研究项目编号:0131通讯作者:林丽琴O摘要目的:探讨广东省茂名地区新生儿葡萄糖4-磷酸脱氢函缺乏症(G6PD)基因突变类型及特征。方法:选取2018年1月至2019年11月我院召回的经茂名市新生儿疾病筛查中心筛查的G6PD可疑阳性新生儿785例,采用G6PD/6PGD荧光比值法法检测G6PD酶活性;采用多色探针荧光PCR熔解曲线法(MMCA)
2、对新生儿干血斑样本进行G6PD基因突变检测。结果:785例新生儿中检出酶活性缺乏者625例,占79.62%,男性和女性醉活性正常、中度缺乏和重度缺乏新生儿比例存在显著差异(PA、c.1376GT和c.95AG是居前三位的热点突变类型,合计占78.90%:99例男性G6PD基因突变样本,均表现为G6PD酹活性缺乏,207例女性G6PD基因突变样本中,56.04%表现为G6PD酶活性缺乏,43.96%G6PD酶活性正常C结论:c.1388GAc.l376GT和c.95AG是茂名地区G6PD缺乏症的热点突变,G6PD基因型和表型致性存在明显的性别差异,在男性患儿明显更高;单独酶活性检测易导致女性杂合
3、突变漏诊,应结合基因突变综合分析以提高检出率。关键词葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症:新生儿;基因突变:荧光PCR溶解曲线法Studyongenemutationofglucose-6-phosphatedehydrogenasedeficiencyinneonatesinMaoming1.ifu,Linliqin,Weilinyan,Chenhailing,WUChUnhOngMaomingWomenandChildren*SHealthHospitalNeonatalDiseaseScreeningCenter,Maoming,GuangdongProvince.AbstractObjecti
4、ve:Toexploregenemutationtypesandfeaturesofglucose-6-phosphatedehydrogenase(G6PD)deficiencyinneonatesinMaoming,Guangdong.Methods:Atotalof785suspectedG6PD-positiveneonatesscreenedbytheNeonatalDiseaseScreeningCenterofMaomingCitywereselectedfromJanuary2018toNovember2019andrecalledbyourhospital.G6PDenzym
5、eactivitywasdetectedbyquantificationmethodofenzymeactivitygenemutationtestwasconductedfordriedbloodspot(DBS)samplesbymulticolormeltingcurveanalysis(MMCA).Results:Amongthe785neonates,therewere625caseswithenzymeactivitydeficiency(79.62%).Thereweresignificantdifferencesinproportionofneonateswithnormal,
6、moderatelydeficientandseverelydeficientenzymeactivitybetweenthemaleandthefemale(PA,c.1376GTandc.95AGwerethetopthreehotmutationtypes,accountingfor78.90%intotal.AmongtheG6PDgenemutationsamplesfromthe99males,therewaslackofG6PDenzymeactivity.AmongtheG6PDgenemutationsamplesfrom207females,therewere56.04%o
7、fthemwithlackofG6PDenzymeactivity,and43.96%withG6PDnormalenzymeactivity.Conclusion:c.1388GA,c.l376GTandc.95AGarehotmutationsofG6PDdeficiencyinMaoming.TherearcsignificantgenderdifferencesinconsistencybetweenG6PDgenotypeandphenotype,whichissignificantlyhigherinthesingledetectionofenzymeactivityiseasyt
8、oresultinmisseddiagnosisofheterozygousmutationsinthefemale.Thecomprehensiveanalysisofgenemutationshouldbecombinedwithtoimprovedetectionrate.KeywordsGlucose-6-phosphatedehydrogenasedeficiency;NeOnate;GenemutationMulticolormeltingcurveanalysis葡萄糖-6-磷酸脱氢前(Glucose-6-phosphatedehydrogenaseG6PD)缺乏症一种伴X-连锁
9、不完全显性遗传病,一般情况下患者并不表现出典型的临床症状,但在特定诱因下,如感染,食用蚕豆或服用具有氧化作用的相关药物(磺胺类、伯氨瞳咻类等)时,患者可出现急性溶血性贫血、黄疸等症氏叫据统计,世界批注A讣经批注A2:筛查批注 IA3):我;:.:i的可疑G6PD阳性新生儿785例,其中女性225例,男 性560例:年龄8h22d.平均8.31 2.53) 1:临床表 现为批注A4:同时进行批注(A5:删除批注A6J:标本采集:新生儿入院后于足跟外恻或内侧 处采血,滴加在采血淀纸上,共采集3个直径不小于 8mm的血班,自然晾干后,行G6PD/6PGD荧光比值法 检测G6PD酶活性:剩余血斑放入清
10、洁塑料袋内密封, 于4C条件卜.保存,待进行新生儿G6PD基因突变检测.范围内G6PD缺乏症发病率达4.9%,并表现出明显的地域差异,在我国呈“南高北低分布H(广东省是G6PD缺乏症高发地区,茂名地区20082018年的新筛中心筛查数据显示,G6PD阳性率达7.58%,但目前茂名地区新生儿G6PD基因突变特点尚未见诸报道。本研究采用多色探针荧光PCR溶解曲线法(multicolormeltingcurveanalysis*MMCA)对广东省茂名市新生儿G6PD基因突变进行检测,以期了解本地区新生儿G6PD基因突变类型及特点,为本地区新生儿G6PD缺乏症诊断和防治提供依据。现报道如下。1资料与方
11、法1.1 一般资料本研究选取2018年1月至2019年11月坡院召回的经茂名市新生儿疾病皤乙杳中心筛查的G6PD可疑!阳性新生儿785例,其中女性225例,男性560例;年龄8h22d,平均(8.31+2.53)d;临床表现为病理性黄疸,ABo溶血,贫血等:在获取监护人充分知情同意后,同时!进行b6PDiW活性检测(G6PD/6PGD荧光比值法)和基因突变检测(MMCA法)。I1.2 方法I(1)标本采集:新生儿入院后于足跟外侧或内侧处采血,滴加在S&S903采血滤纸上,共采集3个直径不小于8mm的血斑,自然晾干后,行G6PD/6PGD荧光比值法检测G6PD酶活性:剩余血斑放入清洁塑料袋内密封
12、,于4C条件卜.保存,待进行新生儿G6PD基因突变检测。(2)G6PD酶活性检测:采集足跟静脉血,采用G6PD/6PGD荧光比值法检测G6PD酶活性,使用AutoTRFIA-2自动荧光免疫分析仪进行检测,试剂盒购自广州市丰华生物工程有限公司,严格按说明书进行检测。结果判定:G6PD6PGD0.95为正常,0.7G6PD6PGD0.95为轻度缺乏,0.5G6PD6PGDV0.7为中度缺乏,G6PD/6PGDV0.5为重度缺乏。(3)多色探针荧光PCR熔解曲线法检测G6PD基因突变:采集的干血斑使用打孔器打下2个3mm纸片,采用Lab-Aid824型全自动核酸提取仪(厦门致善生物科技有限公司)提取
13、DNA样本,DNA试剂盒为配套试剂盒,按说明书步骤严格执行。提取样本采用实时荧光PCR扩增仪扩增后,应用G6PD基因突变检测试剂盒(厦门致善生物科技有限公司)检测。参照试剂盒说明书对样本基因型进行判读,该试剂盒可用于检测中国人群常见的16种G6PD基因突变类型。1.3 统计学方法使用SPSS20.0软件进行数据统计,计数资料以率表示,采取/检验。所有检验均采取双侧检验,检验水平a=0.0502结果2.1G6PD酶活性检测结果785例新生儿中检出酶活性缺乏者625例,占79.62%,在男性和女性酶活性正常、中度缺乏和重度缺乏新生儿比例存在显著差异(PA、c.I376GT和c.95AG,合计占78
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