血清葡萄糖（GLU）己糖激酶（HK法）测定法 血清尿素氮（BUN）谷氨酸脱氢酶测定法.docx

《血清葡萄糖（GLU）己糖激酶（HK法）测定法 血清尿素氮（BUN）谷氨酸脱氢酶测定法.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血清葡萄糖（GLU）己糖激酶（HK法）测定法 血清尿素氮（BUN）谷氨酸脱氢酶测定法.docx（11页珍藏版）》请在课桌文档上搜索。

1、血清葡萄糖（GLU）己糖激酶（HK法）测定法1 .实验原理己糖激酶紫外比色测定法。HK葡萄糖+ATPG-6-P+ADPMg2+G6PDHG-6-P+NAD6-磷酸葡萄糖+NADH+H2 .标本：2. 1病人准备：12小时禁食。2.2类型：血清或血浆（EDTA,肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。3 .标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。加入糖分解抑制剂（NaF,KF）后的稳定性：1525保存可稳定1天，48保存可稳定7天。血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25C下可稳定8个小时，在4下可稳定7

2、2小时。尿样应保存在28下并尽快进行分析。脑脊髓液如果避免蒸发可在28下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20的条件下。4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。6 .实验材料6.1试剂申能血糖测定试剂盒（14125171701试剂1664ml+试剂2616ml）6.1.1试剂组成试剂1：TriS缓冲液pH7.880mmolLMg2*4mmolLATP1.7mmolLNAD1.7mmolL试剂2：Mg4mmolL己糖激酶1500UL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶1500UL6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂保

3、存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如排向下水道请用大量的水冲洗。6 .2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。8 .仪器：奥林巴斯AinOOO生化分析仪9 .操作步骤8 .1

4、项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AUlOOo生化分析仪项目测定参数.SOP文件9 .2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AUlOOO生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与11质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以TrUCaIU复合校准品血糖校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。手工测定计算方法为：Au葡萄糖浓度（mmol/L）=X校准液浓度As12.参考

5、值范围：(mmol/L)新生儿脐带血3.58.81小时2.05.52小时2.24.9514小时1.94.310-28小时2.64.54452小时2.7-4.4儿童（空腹）16岁4.17.0719岁3.95.9成人（空腹）3.96.4参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义：检测血清或血浆中葡萄糖主要用于糖尿病的诊断和治疗监视，还可用于检出新生儿低血糖症、排除胰岛细胞癌以及评估各种疾病碳水化合物代谢状况。血清葡萄糖水平可能会异常高（高血糖）或异常低（低血糖）。葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊乱，包括糖尿病，新生儿低血

6、糖，自发性低血糖，郎格罕氏岛细胞癌等。葡糖尿（存在葡萄糖化尿）在健康，怀孕的妇女中很常见。妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一天之中有一个显著的变化。脑脊髓液（CSF）葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑膜炎与细菌性脑膜炎；细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低（不到的40%至50%血清葡萄糖），病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。癌性脑膜炎（肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透）也使CSF葡萄糖值在正常值以下。14.操作性能14.1线性范围：0.128mmolL14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AUlOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3%0用于分析的质控血清和数据处理

7、符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(mmolL)S(mmolL)CV(%)批间精密度n=20X(mmolL)S(mmolL)CV(%)样品15.050.0470.94样品13.650.0772.11样品26.500.0590.91样品26.720.1422.11样品316.100.1270.79样品316.540.2961.7914.3方法学比较：本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对76个样品进行GLU检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=l.00x+0.OOmmol/L；r=0.998014.4灵敏度:本试剂的检测限为0.1InmOI/L。14.5病人

8、结果可报告范围：0.128mmolL15.超出范围结果处理：本法线性上限为28mmolL.如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:10稀释，重新测定，结果乘以11。16.病危报警值的处理：女性及婴儿的血糖测定值2.2mmoL或者22.2mmolL;男性的血糖测定值2.7Inmo/L或22.2mmolL；新生儿的血糖测定值1.6mmoL或16.6mmolL时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。17.方法局限性17 .1本法线性上限为28mmolLo如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:10稀释，重新测定，结果乘以11。18 .2干扰物质：使

9、用试剂起始法，当样品中抗坏血酸浓度1704molL,胆红素浓度684InoI/L,血红蛋白浓度5.00gL,甘油三酯浓度22.6mmolL时没有观察到干扰。18 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19 .参考文献1. ThomasL.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.131-7.2. SacksDB.Carbohydrates.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemist

10、ry.3,ded.PhiIadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.p.750-808.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。血清尿素氮（BUN）谷氨酸脱氢酶测定法1 .实验原理胭酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。尿素被胭酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和Q-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD+。NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。服酶尿素+2H202NHJ+2HCO3-谷氨酸脱氢能NHJ+-酮戊二酸+NADHL-谷氨酸+NAD+乩02标本：2 .1病人准备：血清无特

11、殊要求。要留取24小时尿样。2.2类型：血清、血浆（不可使用肝素钱）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无镂离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸储水作1:100稀释。3 .标本存放：血清或血浆稳定性：425C保存可稳定7天；-20保存可稳定1年。尿液稳定性：2025C保存可稳定2天；48保存可稳定7天；-20C保存可稳定1个月。4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：细菌污染的标本。6 .实验材料6.1试剂：申能尿素测定试剂盒（14231071701试剂1：664ml+试剂2：616ml）6.1.1试剂组成试剂1：Tris缓冲液 -

12、酮戊二酸pH7. 8120mmol/L7mmolLADPO.6mmolL谷氨酸脱氢酶1OOOUL胭酶6000UL试剂2：NADH0.25mmolL6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存试剂保存于225C,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂己变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必要的预防措施使用试剂。6.

13、2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AU100o生化分析仪8 .操作步骤8 .1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU100O生化分析仪项目测定参数.SOP文件9 .2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU100O生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内

14、质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以TrUCaIU复合校准品尿素氮校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。将尿素量乘以系数2.8可以换算成尿素氮量；将尿素氮量乘以系数0.357可以换算成尿素量。手工测定计算方法为：Au尿素氮浓度（mmol/L）-X校准液浓度As12.参考值范围血清/血浆成人（mmol/L）全球2.8-7.2女性50岁2.66.7女性50岁3.57.5男性50岁3.27.3男性50岁3.0-9.2儿童13岁1.86.0413岁2.56.01419岁2.97.5尿素/肌好比率2540(mmol/L)/(mmol/L)尿液

15、0.43-0.72mold（注：各实验室应有自己的参考范围。）参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义：尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。高尿素血症或氮血症表现为血液中尿素水平升高。鉴别肾前和肾后氮血症时可以同时检测尿素和肌酊。因脱水、蛋白质代谢增加、皮质醇治疗或肾脏灌注减少等引起的肾前氮血症，表现为尿素水平升高而肌酊水平正常。由泌尿管道阻塞引起的肾后氮血症，表现为尿素和肌醉水平都升高，但肌酊升高程度较小。发生肾病时，肾小球滤过作用明显下降或蛋白质摄入量大于200g/天都会导致尿素浓度升高。尿素氮的检测用于诊断和治疗某些

16、肾脏疾病和代谢紊乱。尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%。它通过肝脏中的氨进行合成，是蛋白质脱氨作用的产物。通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中，是消除体内多余氮的主要方法。血液尿素氮（BUN）水平是肾功能以及肾前状态和肾后状态的度量标准，肾前因素引起的BUN的升高包括心脏代偿失调，缺水或增加的蛋白质分解代谢。水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾纤维化和肾小管坏死。任何类型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的肾后因素肾小球清除尿素和肌酸好，但是，尿素随后部分地被肾小管重吸收，然而肌酸酎却不会。因此，血清尿素氮和血清肌酸酎测定经常同时用于肾功能的不同诊断中。14 .操作性能14.

17、1线性范围：O.350mmolL14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AUlOOO批内不精密度小于3心总不精密度小于5%o用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20X(mmolL)S(mmolL)CV(%)天间精密度n=20X(mmolL)S(mmolL)CV(%)样品14.960.275.41样品15.230.305.79样品28.770.273.13样品28.770.343.87样品319.480.251.27样品319.480.552.8614.3方法学比较：本公司的试剂（y）与某商品化试剂（x）,同时对68个样品进行Urea检测，将

18、检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.99x+0.176mmolL;r=0.999。14 .4灵敏度：本试剂的检测限为0.3mmolL.15 .5病人结果可报告范围：0.350mmolL16 .超出范围结果处理：本法线性上限血清/血浆为50mmolL,尿液为5molLo如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%的氯化钠溶液作1:2稀释，重新测定，结果乘以3o17 .病危报警值的处理：当尿素氮测定值36mmolL时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。18 .方法局限性17 .1本法线性上限血清/血浆为50mmolL尿液为5molL.如样品测定值超过上限时，应将样品用0.

19、9席的氯化钠溶液作1:2稀释，重新测定，结果乘以3018 .2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704molL,胆红素浓度684molL,血红蛋白浓度5.00gL,甘油三酯浓度22.6mmolL时没有观察到干扰。镂离子会影响检测结果，因此收集血浆时勿用肝素镂抗凝！18 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19 .参考文献1. ThomasL,editor.Clinicallaboratorydiagnostics.Led.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.374-7.2. BurtisCA,AshwoodER.edito

20、rs.Tietztextbookofclinicalchemistry.3rded.PhiIadelphia:W.B.SaundersCompany;1999.p.1838.3. TalkH,SchubertGE.EnzymatischeHarstoffbestimmunginBlutundSerumimoptischenTestnachWarburg(EnzymaticdeterminationofureainbloodandserumwiththeopticaltestaccordingtoWarburg).KlinWschr1965;43:1745.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。