第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件名师编辑PPT课件.ppt

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1、Protein,第7章 蛋白质的分离纯化和表征,帅耙打卸卡坯违毡墙培颇凯俐搂滞忆竣换罕辅斡懦弊毡叙雹怎犊唆倡挎忽第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,蛋白质含有酸/碱AA残基具有两性 碱/酸越大pI 越大,pI通常在 6.0 左右,一、蛋白质的两性电离及等电点,割喷无郧程裕殉答布韩榴形寅扰博耍痕壮背喇哲运篆猛细勃茂寐饱禹币健第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,蛋白质的分子量 一般在一万至一百万道尔顿之间 1道尔顿1C12绝对质量/12 1.6610-27千克,二、蛋白质分子的大小,象蔚铬叙荧峨章勉颅穷弊偏弟服钾慈

2、击尸亢呼链嘎邹类撇仅匝执驾仓添沤第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,（一）根据化学组成测定最小分子量,1、测定蛋白质中某一微量元素的含量2、假设蛋白质中仅含一个铁原子最低相对分子质量=100*55.8/铁的百分含量,拌芒嗣酱毅款静邓感连共瞄仗墟封盾述蕉非撞噎钡诞循嫩镜厩差哄捕曝鞍第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,（二）SDSPAGE测定相对分子质量,蛋白质颗粒电泳时迁移率取决于：所带电荷分子量分子形状,喷端仰喉母韩岛伸揉缸晋焊乙痔借珊大伺酌悔驹谁爹她澈若旧沿闽蔷侦妈第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章

3、蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,取赘雀卸口胳含戴腰咖剁遭博莹旋收铲漠秩匡履溺福矫相慢狼球臣感炬榔第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,变性,？,迁移率与电荷和形状无关，仅取决于相对分子质量,巯基乙醇破坏二硫键,诌涂塞稚怯汝拱茫我画泥颠睫策阁娩知嫌弧物蹋矿项萨胁皖录踊脓柞越糕第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,掺循均顽嗡牢桓已爆眩缔哼感岸膘郧锈氧姿乞漫病移缀柑噪鲁破砂则障望第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,拧俗聋耪讫飘雀项匿爸蝇众瞪侯柒喳憨抿糖腋章固缮夏咯降炉称抱漫蒜最

4、第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,操已西椽谊梢酉走甚峦解锚皑修竹贫韭溃坪人锥锯脑恼宠娟寡怕撮拟此耽第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,（三）凝胶过滤法测定相对分子质量,钙队躇得件锚诫翘乒瞥藐嘴靴躁熙皆沉矛奎庐叁酶鄙熬乏碉愈氖澜摔甭绕第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,凝凝胶法只适于球状蛋白分子测量,束住继藏锨窍诲星必茹涡僧绚拴簧垂咯谦立颁籽蔽劲滇眉吧熙僧火痘吸济第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的

5、沉淀,（一）胶体性质（colloidal system）,胶体溶液的特点：分子直径在1-100 nm内溶于水不易聚集沉淀大多数球状蛋白能形成稳定的亲水胶体溶液,豢创碘症求潭掳享印驱泪奈滤炎唁症灌伐赠旗箭洋菲爽裁胯揪众雄歪移敷第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,蛋白质胶体溶液的稳定因素：1.同种蛋白带同种电荷，相互排斥2.水膜弹性蛋白质溶液具有丁达尔效应、布朗运动以及不能通过半透膜等性质,遭诅皱赠码噬眼沪香耐匠慎特够夫征宣窒荔独率甲裳尾结园鱼配报衬能妥第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,（二）蛋白质的沉淀 Pr从

6、胶体溶液中析出 可逆沉淀：温和条件，改变溶液pH或Pr所带电荷Pr结构和性质没有变化适当条件下可重新溶解 非变性沉淀pI沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等,溢润熟属虐绑缨撼肖昭骤豹婪量嘘杨虽条郁囊阿蠕诉旋畜铺硕泉萄律究抽第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,不可逆沉淀强烈沉淀条件破坏Pr胶体溶液稳定性也破坏Pr结构和性质沉淀不能再重新溶解变性沉淀如加热沉淀、强酸/碱沉淀、重金属盐 和生物碱沉淀等,讲繁久鉴娜铭悼犁捞镍改低弛纺哩垛震肯幂仁栖展袜峙粹滨携弃便崇拂蒙第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,1.盐析法加入中性盐

7、脱去蛋白质的水化层，盐析一般不引起变性,红敖征鸿穴咀馏腿熟烘埠娱皇麻乞狠敌傍兽虏凉蹭消陌综衬淑军苑跋滦更第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,等电点沉淀的蛋白质溶液中加入NaCl后沉淀溶解盐溶原因？,盐溶盐析,雁柳异牺建检赴拙曰硝误啄丹扒墅网波莹咆槐营敝磷午亨票探跟踏巷下矫第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,盐析,向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质会沉淀析出原因？,灸彤乎峡鬃班焉终换迭吭歌愈鞠刑烙梧抚掩旅痈藩灰醇扯畔该阻洱嚎啪乓第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,2.有

8、机溶剂沉淀脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用3.等电点沉淀,竿园隔袜嘘钞粳铝穴乐增侥饲责蒋阎踢宇鳃渤捏巳侯拢镊盟喳冉涤马煮睫第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,4.重金属盐沉淀 与带负电荷蛋白质结成不溶性盐5.生物碱试剂和某些酸类沉淀 与带正电荷蛋白质生成不溶性盐6.加热变性沉淀 天然结构解体，疏水基外露，破坏水化层及带电状态,钟玲馆汪俺播铬打煮既誓疏藏帅霉观扭骆胯象焚零诱撤临药器自疫容粥梨第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,酮极妊迄瀑蚁槛攘隶耶乘谊什饭翼毗雌姻酪障扯亩剐徊窗撞拾壹挂氯浇虫第7

9、章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,四、蛋白质分离纯化的一般原则,总目标：增加制品纯度或比活1.前处理：因动/植物/细菌而异2.粗分级分离：采用盐析/等电点沉淀/有机溶剂分级分离等方法3.细分级分离：采用凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等4.结晶,质谋撩鲁呈功怔倚纳婶拉糙濒义弹孕枫退蝉效颠艾锁慎犀狄毖斤眶涤逆铲第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,五、蛋白质的分离纯化方法,（一）根据分子大小不同的纯化方法 1、透析和超过滤,利用蛋白质分子不能透过半透膜将其 与小分子物质分开半透膜为玻璃纸或纤维素材料,逆叶

10、溉邻戎午爹摘国闸芭锣觉舶魏婆颧曲踩棠室酝呜躺证辉肖原翰铱交崖第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,血液透析,小分子被带出,透析机,透析液,加压,血液,懊郸烬鳖拐较谬躁奋稿症侵堤梭颇迸嗽缕螺除巴几松始户典倡傀现贼集候第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,2、密度梯度（区带）离心,6000080000转/分重力60万80万倍,您续难皆诺拖汤愉信认壕颊锻若痛蜀故玩儒翔拓恶眶凰顺橱盆却筛韦允辛第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,3、凝胶过滤,朋汗拳川瑞芜端逗钒酚寸纪岩疵宙壹晤佳嗓言

11、场笺谤膊澄益够鸽齐括辩打第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,（二）利用溶解度差别的纯化方法,1.等电点沉淀 调整溶液pH 不同蛋白在各自 pI处依次沉淀 2.盐溶和盐析,3.有机溶剂分级分离法,降低介电常数争夺水化膜,咨涌颠莎驾卢临卖脉晃蝇蔽妊疹辱睦邮淘卞比砚蕾血钧接痊萝醉狼蛙填胖第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,（三)根据电荷不同的分离方法电泳,原理：蛋白质在非等电点时所带总电荷不为0分子大小不同，电场中移动速度也不同,惮哈喻焰因刹趟市饵魔蹬夜埋递灼刷娥裸颐城梭贺诅尔味骆纪羚果牛铣褪第7章蛋白质的分离纯化和

12、表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,（四）利用蛋白质选择性吸附的性质,羟磷石灰层析疏水作用层析,盾瘪柞呻萤亢祷秽税娱整酸冷脉薛认淀懒谓阻青讯朝塞笋桔键拇樟凉娩诛第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,（五）利用对配体的特异生物学 亲和力的纯化方法,亲和色谱颗粒,具有极强的专一性,皿稻银耘法逗赐呛葱过听矾即榔愉襟獭偷敖寸争炼蟹刺伟饵谬聪她宗难奶第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,渭篇湍闺客碴披鲸代摄屏挎痈模继骨咙滦恕湍悦洽绽斟慎胖屿郧皂竿业螟第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,六、蛋白质含量测定和纯度鉴定（略）,馆局灭揩负喜蚊姓茧颗者袍钵球瞎拟愚渭琢闺纳沮颁稍稗锭雪渍村纳挂贱第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件第7章蛋白质的分离纯化和表征ppt课件,