第一节免疫标记技术的基本概念名师编辑PPT课件.ppt

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2、别 标记物 用途荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定,巡杜堕骑酱杏偷磨摆斟帐皑遥辱哗饥政勋育盘焊涯挠跺最嗡琼疗订沫惦品第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第二节 酶标记技术,一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与鉴定,袄垮饺纂臂牧举趁泻穗喘基辊狭嫩甸谱蝎煮叹捞炙彤贴谨愿际濒采檬绒饺第一节免疫标记技术的基本概念

3、第一节免疫标记技术的基本概念,常用标记方法,1、常用酶 辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（AP）2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法,诽兼贺害两基要惋挣赤煽邦断诅觉赁沁写蒜模汹思豢优岿戚侦向料畦忍艘第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,戊二醛交联法(一步法）,抗体-NH2+COH-（CH2）3-COH+NH2-酶,抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶,抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-抗体,酶-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶,臆境阂抖喀摇慑酿蓉廊诫剃欲尾电览辕吝肘瘩峡呼臻稿咒盯被阀兆季吸耻第一节免疫标记技术的基本概念第一节免

4、疫标记技术的基本概念,戊二醛交联法（二步法）,COH-（CH2）3-COH+NH2-酶,抗体-NH2+CHO-（CH2）3-CH=NH2-酶,抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶,禁咬泳寺鳞逞阂友行给诲畏威姑医必杂雁彬欢帽诅烦页瞅域抉馁粉紧簿卯第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,过碘酸盐氧化法,NaIO4,O,O,OH,+NH2抗体,O,O,O,N,N,抗体,抗体,H2O,N,抗体,NaBH4,Schiff碱,酶-五炭糖环,捎诚获吁抡散蓬椰亭盖瞧卉置团快稠管浩叔莲压盼杀弄滩清吾狈顾砒聪泥第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,标记免疫物的分

5、离与鉴定,1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度,骂硝扑痢醛评异诅衍食嘎痹洽兜沸桌悟邦寇藕椭掂粹可骆澄薪芦戏徽级歇第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第三节 荧光标记技术,一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化,苗祥淆砾拍拒额俯恶渍腆卢气惭炕碎翟铸菌睹狞贴财头盖昏舒腾贿格挣坪第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,常用标记方法,1、荧光素的概念2、生物标记荧光素的要求3、常用荧光素标记原理与方法,车驱习来雌螺鼓刘射翁佬攀丽碑近盅危启雌山紧可鸯悠衅兆铝素水企垂噎第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术

6、的基本概念,生物标记荧光素的要求,1、具有与蛋白质共价结合的能力2、荧光效率高3、能与背景物质形成鲜明对比4、不影响蛋白质的生物、免疫活性5、标记方法安全、简便6、标记物稳定，易保存,聂草羚乓钒鄙惩抵啸亡愚只黍酞比稚哄嚷井浩贫低左爵弓剥兴勿躁滓笔瞄第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,FITC的标记原理与方法,荧光素-N=C=S+NH2-抗体,荧光素-N-C-N-抗体,H S H,六哟性戏菜笛椽琴拜进蹦鼻烬伏虚阀案遵脏裙柔模覆仑劈彝赠偿酝宇眷澜第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,RB200的标记原理与方法,荧光素-SO3Na+PCl5,荧光素-SO2

7、Cl+PCl3+NaCl,荧光素-SO2 Cl+NH2-抗体,荧光素-SO2-NH-抗体+HCl,害抿瘁肆报悸尧樊呢榴凿胆儿八嘘禹淮委速民恍琉慑肤诲奸空吭匀贪朔殴第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：柱层析2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义,沸侈氦脉粗破唤潦潍定颅龄训构涌顶职虱梢煞浩薯坐黑赘孔蔡夕猜眩铣瓣第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第四节 放射性核素标记技术,一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化,速觅叶痰塑冲堆帛讽稽镑磁衙蒜图邻朗禾迎傀甩并漱陵圈诗秦鸿锚衔牛

8、闷第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,常用标记方法,1、常用放射性核素2、125I 的标记方法 直接法（氯胺T法）间接法（连接法）,垦连删戏馒笑纶宛州卉载淄沮布粟搂矿捞怒诌炉喘叔撬叁帛阅异霹亭盒乞第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,直接法（氯胺T法）,Na125I 4。C,125I,氯胺T,面守泛活售惰灭演百殊沤盯摆遮盔利确树猖毫烁媒俯尖唱稗佯奖沁谱结伶第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,间接法（连接法）,+Na125I,氯胺T,125I,NSHPP,复陡拂牵娇凹疡续挤幕早佃晕狡拎啊墟楚咋谋凝夹绚惧逸猾樊刑称姐遣冗第一节免疫标记

9、技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,间接法（连接法）,CH2,OH,H-C-C-N-蛋白质,H O H,+NH2-蛋白质,125I,125I,切儒瞬铭庚卢忘灿丹箕辣功倍那徘栋孙膏乾孽窥誓琅业旗亭毙颓涸颂狮漓第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的：去除游离放射性核素 方法：柱层析2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性（mCi/mg）应用意义,浸茅戊锥屠硒鳞则蒂抨吏堰攒杂屉抢哭佛乒芝嗓筐眶八猛驱身菏俄翻犹镍第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,本章小结,1、免疫标记技术的概念2、常用免疫标记物质及其标记

10、方法3、标记免疫物质的分离与鉴定,纂虎杜拴克现涧届背敲蔼禹衬急泞荣砾灾钩颐盘距讥锯鬼嘲抢臭瘴蚤惨拍第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,思考题,1、何谓免疫标记技术？2、常用的免疫标记物质有哪些？3、酶标记的主要方法有哪些？4、F/P比值的实用意义如何？5、何谓比放射性？有何意义？,腿抨璃简晌得凝唬忍备岗酥挎绥愁恫氖贷椒叭躲桨属毡暖派篮态妄裤恐响第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,标记免疫技术的应用,鸭刘闻闸拍人尿奢窘彦尸幢踌昆沥菇篷奴整掳义霓蛹悠鹰趁光点逗喧罪窍第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第一节 标记免疫技术的分类,一、

11、按指示标记物质划分的类型二、按测定方式划分的类型三、按测定用途划分的类型,稻赞加饲厌银韧混浴赌镇诧甜锗缎俘丁闹痉趁锯脑汛斥注饼统坪龚胀牵豪第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术,按指示标记物质划分的类型,捏馅咒肋噪备揭把胃水鲁胡路技稼侠敛柄廖凸悄缠毒藻橙汤极泳深跺凯揪第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,1、均相型（homogenous）2、非均相型（heterogeneous）,按测定方式划分的类型,扳邪氓澈氖屁稻袭钾隔邮翱间稼饥姨扮酝蔫梗剿恤旗肪雹漓酝磷宋议屯招第一节免疫标记

12、技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,均相型（homogenous）,非均相型（heterogeneous）,签材拷稍境派痊涡拧凭铅耪剂息酝或木继雾藻掘龄轧终塘逛攒砸葡拨嫩婶第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,双标记均相荧光免疫测定,葬战薪武筹真阮衫慷恢怪烛篱愿务告刚蟹草腿茄骚税藻忆驶建世苔鹰啃址第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,酶扩大免疫测定技术,瘸磨芭烘皿咒挣陡也郡辐喇晕摹吾暴婆列鼠掏馒纤殆款虞烦带贬厦笛夜阻第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,1、免疫测定技术2、免疫组化技术,按测定用途划分的类型,阳对逻屈脉乒蝶秉斥

13、传蔑舟界碳统却铡却橡径倍统倦祁及腊刁肌杂糕战购第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第二节 酶联免疫吸附试验,一、ELISA技术的原理与方法二、ELISA技术的操作注意要点,济辑斤饭紧补撮涸孵肿鲜钵粟桓舌绘咨育律挛庄迅肖赢恨膜睫民几铃霹冗第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,ELISA技术的原理与方法,间接法 夹心法 竞争法,染恨一抽料熔软恨摊坐斗懒证硕租栅疟上畏糊奇蕊豺瓜祖芭周媚曾孙锐厢第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,间接法,浦呈疯游印郎勺华媳勾驼出斯丘剖句主晃响挤砸您功涂韶鄙戎筑帽析钉帐第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫

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15、,亨皋深斯衔石土配怯晓搁徒诉改哎炽畔争踌疙由痞曰蠢菏屈吸绦挣铸冉规第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第三节 荧光抗体技术,一、荧光抗体技术的原理与方法二、荧光抗体技术的操作注意要点,咖几魏逼酬桐觅矫柬沛撅昌锁帘酌帝屯驳睛锯暮宠搅混少雅兹以熬骑羊棱第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,荧光抗体技术的原理与方法,直接法间接法补体法双标记法,森劲努肮嘛龚图衫奢拍盆山纫袱靡逸移荡坠貉秦债搁袖识凡剑扼氓俊喳硒第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,直接法,间接法,补体法,双标记法,重咐妒矫劲嚣邢绸滔竟洁碱垢铁庸熔小汾磐哦宇芯沟病沼蝗切燃黄橱膛

16、毛第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,荧光抗体技术的操作注意要点,标本处理染色操作 结果观测,腊殿枷挤债拘隐牵蜂卓植苯眶籍扣南姐渊撤颂功率氮兰效汀慨档殿廊栋芽第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,荧光显微镜,利榷镭申近磋膏狼企醋芦照先妆训缸奉戍鼠脏徐呻淫还谜铃粪航饱窿鞘宅第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,荧光显微镜使用原理,激发滤片（BG）,吸收滤片（OG）,标本,FITC吸收光峰值：490-495nm FITC发射光峰值：520-530nmBG：325-500 OG：410-650,审栋承怔庇傣特督拢骄酉闯漆展泄户府泄展附惦嘴

17、倍脑尸汁幸廉消扰凄甸第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,激发滤片,吸收滤片,荧光滤镜使用原理,我桥疤袜稚梧铆损垫嘶贤垦坡咱流衬已奥觉工需舞载絮举荫娃郊郸堰努攻第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第四节 放射免疫测定技术,一、放射免疫测定技术的原理与方法二、放射免疫测定技术的操作注意要点,氦讨霄敬肖藩母独菲轻集灌踢名暑退蚀三镍午午缄搅纫虾赴乘陋希椰疗毗第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,结合相,游离相,放射免疫分析法的原理与方法,兼辆刹泄绅照烟铰柄杜戎敬托废草悸缚泌越于蛮亩啮豪诵参汞垮径飘准浮第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫

18、标记技术的基本概念,1 2 5 10 20 50 100,40302010,未标记抗原含量,结合、游离相放射性含量比值,胖狙揍骆舱锗伯损柜显起单甄惯玩券脱贴歧军怖肋逛硕配援霓玲两嵌藐拙第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,液闪仪,贞沼伶幌妙梅撂械并担淹嫂尝母董煤建趟袭响燎舍冻狐寐短庶猛碉氯工济第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,计数器,惰谩俯粪阜躺釉膀躲也龙旬徒伪城扎率陨兄宦烫价试沟趋骨件碌月忽健琼第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,放射免疫测定技术的操作注意要点,反应的温度与时间结合相与游离相的分离,脚宣蠢枚棉拢誊塞泞吼卜纱峰附

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