HIV抗体初筛实验室质量控制.ppt

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1、HIV抗体初筛实验室质量控制,医学实验室质量管理的发展,HIV抗体检测的相关说明,艾滋病检测实验室质量管理,HIV抗体ELISA试验质量控制,内容提要,医学实验室质量管理的发展,五十年代提出质量控制（Quality Control，QC）的概念统计质量控制（临床生物化学检验）确定控制对象规定控制标准确定检验方法进行实际检测，获得实际数据说明实际数据与规定标准之间的差异提出相应改进措施,医学实验室质量管理的发展,八十年代提出良好实验室实践准则的概念（Good Laboratory Practice，GLP）质量控制 质量保证（Quality assurance,QA）强调从样品收集到报告发出后的

2、解释的全过程质量管理技术人员的组成及培训实验工作的组织管理实验室的环境条件实验方法及实验操作说明设备、试剂、消耗品质量保证样品收集预处理，检验过程和试验结果报告的程序的质量保证,医学实验室质量管理的发展,九十年代质量体系认证及实验室认可制度国际标准化组织(ISO)等机构为统一各国存在差异的GLP标准,以各种标准文件规定了质量活动的行为。认证:认证机构依据程序对产品、过程或服务符合规定的要求给予书面保证（合格证书）。其权威性与运作机构密切相关。不知名机构的认证没有任何意义。认可：权威机构对实验室有能力进行指定类型的校准或检测所作的正式承认.,医学实验室质量管理的发展,实验室认可机构：中国实验室国

3、家认可委员会(CNAL)CNAL是经中国国家认证认可监督管理委员会批准设立并授权，统一负责实验室和检查机构认可及相关工作。认可程序:申请 现场评审(专家评审、能力验证）整改 CNAL审查 缺陷整改 CNAL批准认可,医学实验室质量管理的发展,截止到2006年6月30日,医学实验室质量管理的发展,实验室质量管理的内容1 确定质量方针：最高组织者实验室负责人制订的质量工作的总的宗旨和方向，并以文件形式颁布。2 质量体系的建立：包括组织机构、岗位责任、人员素质与培训、实验室内外环境及管理制度、仪器及试剂、检测程序、原始记录等各方面。3 质量手册的编写:用文字的形式描写质量体系所形成的文件。4 质量体

4、系的运行。,艾滋病检测实验室的规范化要求,全国艾滋病检测工作管理办法 卫生部，2006年6月全国艾滋病检测技术规范（2004年版）中国疾病预防控制中心，2004年8月,生物安全,检测质量,SARS!,样品检测,样品的危险程度与样品检测项目无关！,？,艾滋病检测实验室质量管理,全国艾滋病检测工作管理办法 第六章第二十六条 艾滋病检测实验室应建立健全实验室质量保证和质量控制体系，并有专人负责质量体系的正常运转。全国艾滋病检测技术规范 第八章第3945页艾滋病实验室质量管理,质量保证,质量控制（QC),质量评价,质量管理,影响免疫学检验质量控制特征的因素,1造成误差的原因多（1）标记物的不同（2）同

5、一标记物的不同检测方法（3）同一方法不同的试剂盒（4）生产厂家的不同生产工艺及管理的差异（5）试剂批间差（6）环境的因素，包括季节、温度（7）使用仪器的差异（8）操作水平的差异2试剂的有效期短，稳定性差3免疫试剂成本高4检测频率与批间概念,质量控制（quality control）,现代质量控制理论全过程的质量控制画质控图是一种“狭义的”质控。检验的全过程质控(简称：全程质控)是一种“广义的”质控。,改进实验室质量的努力已逐渐置于分析前和分析后阶段。没有好标本，检测系统无法获得可靠结果，质量控制方法也无能为力。因此从病人被临床要求进行检验起，直至取样品作检测前，必须重视病人准备和识别，标本采集

6、、运送、处理、保存等每一环节，确保病人标本的质量。分析后对检验结果的数据运送、计算、打印出检验报告单中，任一疏忽出现的问题，应属于差错，不是分析误差。差错不是要控制而是要消除。在开展分析中的质量控制的同时，应充分重视分析前、后的检验过程的质量管理,质量控制（quality control）,“广义的”质控，分为两个主要部分：室内质量控制(internal quality control,IQC)室间质量评价（external quality assessment,EQA）,质量控制（quality control）,室内质量控制(IQC),医学实验室的过程控制即室内质控所有检测项目均需有室内质

7、控措施项目操作者就是该项目的质控负责人要有文件说明质控的程序无质控措施不得出具报告 不使用质控血清的室内质控：试剂盒阴阳性对照、病人资料统计等等,临床检验工作和其他分析领域工作最突出的差异，是临床检验对每份病人标本只做一次检验就发出报告。使每份报告引入的误差，较之取多份样品，做多次检验取均值报告结果内含有较大误差，特别是随机误差。因此必须强调做检验一定要有质量控制。将控制品和病人样品一起做检验分析。,室内质量控制(IQC),室内质量控制是用来监测试验的分析性能，控制检验误差来源。通常通过分析质控物来执行质量控制，用统计分析的数据来描述分析性能。统计质量控制可监测到仪器、试剂、环境、操作者的变异

8、对检测过程及结果的影响，并判断检测结果能否接受（在控或失控）。对失控情况采取的最好措施是找出问题的原因，并消除原因，而不是常规的重复质控测定,室内质量控制(IQC),与临床化学测定相比，ELISA有特殊性。最合适的质控方法尚待研究建立。有些实验室不是每天进行ELISA项目的检验，而ELSIA试剂盒效期短，用一批号试剂盒连续常规测20次，难度较大。,室内质量控制(IQC),质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少20个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做5个批次的检测，每个批次中不少于4个质控物测定结果，以建立一个临时性的平均值和

9、标准差，当达到20批次数据后，替代临时性的平均值和标准差。,室内质量控制(IQC),概念说明 1）最佳条件下的测定误差(OCV)在本实验室最佳条件下（包括操作者、试剂、仪器等）检测质控血清20-30次，测得结果计算，求出该组数据的均值和标准差 2）常规检验条件下的误差(RCVK)常规检验的技术人员，在常规检验的条件下，将质控血清放在常规检测样本中，进行20次检验，结果计算同OCV法。一般认为RCV的SD在OCV的SD两倍范围内可以接受 3）未知值的血清在常规检验条件下的误差(RCVU)测定步骤同RCVK，但检测的操作者不知质控血清的定值，或在操作者不知哪份是质控血清的条件下进行常规检验，以排除

10、操作者的主观性,HIV抗体ELISA试验室内质控实践,常规条件下，RCV肯定比OCV大。通过控制各项条件（例如较正加样器、纠正洗板操作、调正温育温度等），使RCV的数据尽可能接近OCV值。RCV的数据反映该实验室日常工作的质量，用于作质控图。,HIV抗体ELISA试验室内质控实践,ELISA定性试验的临床意义在于是否检出病原体，与检出量无关。理想观点：要保证试验的灵敏度和特异性。生化的质控图方法仅能观察灵敏度而无法监控特异性,室内质量控制(IQC),室内质量控制（IQC）的意义通过室内质控，连续地评价本实验室测定工作的可靠程度，判断检验报告是否可发出。通过室内质控，提高常规测定工作的批间、批内

11、标本检测结果的一致性。注：临床免疫学的“批”为一块板，以此为质控点点图,室内质量控制(IQC),内部对照质控血清试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。只能在同批号的试剂盒中使用。内部对照是质量控制的基础必须使用内部对照,外部对照质控血清为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清,HIV抗体ELISA试验室内质控实践,外部对照质控血清：包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照。设立外部对照，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。,HIV抗体ELISA试验室内质控实践,室内质控的目的在于能控制实验

12、室每天的检测结果是否可靠，能否报告，是实验室管理的最基本措施。临界值血清做室内质控血清可防止弱阳性标本漏检，每次实验时随标本加测，每板一孔如未失控证明实验可靠，原始记录保存可作发生纠纷时的一个关键证据。实验过程中失控现象时有发生且以超过下限为多见，致临界值结果阴性，此点应引起特点重视，必须将失控板重做并找出原因，以确保报告准确性。认真开展室内质控，可以促进规范化地试验操作，有效地保证检测质量。,HIV抗体ELISA试验室内质控实践,内部对照质控血清和外部对照质控血清与标本同时检测。以表格形式记录每块板的外对照实验结果，作为QC资料存档。,HIV抗体ELISA试验室内质控实践,正确使用室内质控品

13、：每块酶标板均应单独设立一孔外部对照,失控状态的分析与处理记录,完整保存纸质试验记录质控数据原始记录试验操作者：谁（签名）试验日期：什么时候试剂厂家及批号：用什么样品情况：检测了什么样品检测结果：结果如何,质控数据汇总与分析,为谁汇总分析？,HIV抗体ELISA试验室内质控实践,质控品的使用质控品按临床样本对待，操作应依照实验室安全管理条例执行。质控品使用前应在室温（1825）平衡30分钟，且使用前应混匀。外部对照的设立：日常检测中，每次试验均应设立一孔外部对照（一次试验中使用多块酶标板时，每块酶标板均应单独设立一孔外部对照）。质控品开盖使用后，可保存于28，稳定2周。质控品应避免反复冻融。,

14、ELISA试验如何进行室内质控,即刻法的警告“检出率”高，可及时发现有无失控。用即刻RCV代替OCV。,HIV抗体ELISA试验室内质控实践,绘制质控图的要求首先采用“即刻法”质控建立HIV抗体检测质控图框架，在以后的每一次检测中，都必须设立外部对照质控，并将检测结果点入质控图中（图中应注明：质控图名称、所使用的试剂及其批号效期、单位、制表人姓名、制表时间等）。参与计算的检测值宜采用质控品的吸光度值/临界值（S/Co）。出现失控或变异时，应有分析和评价以及纠正措施，并且需有阶段性质控图总结。更换诊断试剂或批号时，请重新绘制质控图。,HIV抗体ELISA试验室内质控实践,“即刻法”质控的应用注意

15、事项,“即刻法”的操作指南中说“.当S I 上限和S I 下限值处于n2S 和n3S 之间时,说明该值在2 3 s,处于警告状态.”把“该值”理解为“末次测定值”，是对测定异常值的误判。“该值”是指“这批测定值中的最大值或最小值”。,“即刻法”质控的应用注意事项,用“即刻法”进行室内质控,在n 较小时,有些离群值可能不一定会显示失控。但随着测定次数的增加,测定值逐渐趋于稳定,这时从前的离群值将“暴露”出来显示为失控。这一现象有人将其命名为“回顾性失控检出”,为该法的一大不足之处,至今尚无令人满意的处理办法,但至少应将离群值删去以免影响以后的质控,而且应分析当时实验情况,寻找失控原因,防止错误的

16、再次发生。,HIV抗体检测程序,报告HIV抗体阴性,报告HIV抗体阴性,/,初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。,/,/,确证实验室负责,初筛试验呈阳性反应样品的转送要求,重新采血，将两份标本一同送检。重新采血,虽然操作起来有些麻烦，但有其必要性。因为有可能因为样品号混淆或样品受至污染，使确认结果产生错误（确认结果与受检者实际是否存在感染的情况不一致）。填写“HIV抗体复测送检单”（附表2），经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。,艾滋病检测确证实验室确认流程,用两种试剂复检。复检中出现阳性反应的标本，用蛋白印记试验（WB）进行确认检

17、测。出具“HIV抗体确认检测报告单”：HIV抗体阳性（+）HIV抗体阴性（）HIV抗体不确定（）,“HIV抗体不确定（）”的说明,HIV抗体不确定（）：出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。原因 早期感染 非特异性反应 正常献血员【11/208】；其它病毒感染【风疹/腮腺炎/巨细胞病毒/登革热/带状疱疹病毒/腺病毒】不确定反应（仅显示P24或P17）,随访复检：每3个月随访复检1次，连续2次，共6个月。必要时可做HIV-1 P24抗原或HIV核酸测定，但检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果。,“HIV抗体不确定（）”结果的处理,HIV抗体检测技术要求,建立标准操作程序禁止肉眼判读！保证酶标仪，洗板机正常运转保证加样器准确选择高质量的与加样器配套的TIP头使用有效期内的试剂保证样品质量,影响ELISA测定的因素,试剂盒的因素：妥善保存试剂，在有效期内使用试验操作 形成良好的操作习惯：加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。严格按试剂说明书操作:空白孔不加样品和酶标试剂 操作过程中集中精力：避免加样错误,