临床常用免疫学检查1.ppt
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1、临床常用免疫学检查,临床常用免疫学检查包括,第一节 体液免疫检测第二节 细胞免疫检测第三节 肿瘤标志物检测第四节 自身抗体检测第五节 感染免疫检测第六节 其他免疫检测,教学目的与要求:,了解掌握临床免疫学检查的主要内容、检测原理以及临床实际应用的重要意义,重点与难点,各种抗体的特点补体定义及CH50测定淋巴细胞亚群测定的临床意义肿瘤标志物及其特异性,AFP与CEA的特点,各种类型的特异性自身抗体与自身免疫的关系及各类型自身抗体检测的方法及临床意义CRP测定以及临床意义,临床常用免疫学检查包括,第一节 体液免疫检测第二节 细胞免疫检测第三节 肿瘤标志物检测第四节 自身抗体检测第五节 感染免疫检测
2、第六节 其他免疫检测,一、免疫球蛋白(Ig),定义:是由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的球蛋白,存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。检测:感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺陷性疾病的诊断、鉴别诊断、疾病进展和预后。,血清免疫球蛋白分类,根据重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同,分为五类:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE,血清免疫球蛋白分类,检测方法,酶联免疫法(ELISA)放射免疫(RIA)荧光标记免疫(IFA)化学发光法(CLIA)免疫透射比浊、免疫散射比浊,免疫球蛋白G检测,IgG人体内含量最多,占Ig的70-80再次免疫应答的主要抗体对细菌、病毒和寄生虫都有抗体活
3、性唯一可通过胎盘的Ig,参考值,7.016.6 g/L,临床意义-IgG 增高,多克隆性增高 见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病单克隆性增高 仅见一种Ig增高,主要见于免疫增殖性疾病,如IgG分泌型多发性骨髓瘤,临床意义-IgG 降低,见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、也见于重链病、轻链病、肾病综合症、病毒感染和服用免疫抑制剂的患者。,免疫球蛋白A检测,两型:血清型IgA,分泌型IgA(SIgA)。,血清型IgA以单体形式存在,分泌型IgA(S IgA)由J链连接的二聚体和分泌片组成。,参考值,血清IgA 0.73.5 g/L,IgA占10
4、-15。SIgA 唾液0.3 g/L,泪液3080 g/L,初乳5.06 g/L,粪便1.3 g/L,临床意义,IgA增高 见于IgA型MM,SLE,类风湿性关节炎,肝硬化,湿疹和肾脏疾病等IgA降低 见于反复呼吸道感染,非IgA型MM,重链病,轻链病,原发和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病,免疫球蛋白M检测,IgM是五聚体,分子量最大的Ig不能通过血管壁,不能通过胎盘个体发育过程中最早合成的抗体,脐带血IgM增高提示胎儿宫内感染体液免疫应答中IgM是最早产生的抗体,参考值,参考值 0.5 2.6 g/L,临床意义,IgM增高 见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等,原发性巨球蛋白
5、血症时,IgM呈单克隆性明显增高IgM降低 见于IgG型重链病,IgA型MM,先天性免疫缺陷病,使用免疫抑制剂,淋巴系统肿瘤和肾病综合症。,免疫球蛋白E的检测,IgE是血清中最少的一种Ig,占血清总Ig的0.002%。是一种亲细胞抗体,介导型变态反应,与变态反应、寄生虫感染和皮肤过敏等有关。,参考值,ELISA法为0.1 0.9m g/L,临床意义,IgE增高 见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿性关节炎,以及各种过敏性疾病和寄生虫感染等。IgE降低 见于先天性和获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期应用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩展症等。,血清M蛋白,M蛋白(M protei
6、n)或称单克隆免疫球蛋白,是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。,【参考值】蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法:正常人为阴性。,图14号为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱,【临床意义】检测到M蛋白,提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于:多发性骨髓瘤:以IgG型最常见,其次为IgA型,IgD和IgE罕见,也有IgM型的报道。,巨球蛋白血症(macroglobulinemia):该病血液中存在大量单克隆IgM。重链病:出现Ig重链轻链病:出现单克隆游离轻链。半分子病:系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段。恶性淋巴瘤:血液中可出现M蛋白。良性M蛋白血症
7、:,二、补体(Complement),补体是一组具有酶样活性的糖蛋白,加上其调节因子和相关膜蛋白共同组成一个补体系统参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理性反应,补体的三条激活途径,(一)总补体溶血活性检测(CH50),原理:抗体致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)可激活血清中的补体C1,从而引起补体经典途径的连锁反应,导致绵羊红细胞膜上形成多分子的聚合物,绵羊红细胞溶解。溶血程度与样品中补体量呈正相关,以50%溶血作为检测终点(CH50)。主要反应补体经典途径的综合水平。,+,+,C,一、溶细胞作用:,靶细胞,抗 体,抗原抗体 复合物,C1-C9,靶细胞溶 解,C4,细胞膜,识 别 阶 段,C3
8、转化酶的形成,C4b,Mg+,C4a,C2,活化阶段,C5转化酶的形成,C4b,Mg+,C4a,C2a,C3,C4b2b3b 是C5 转化酶;它导致膜攻击复合体(MAC)的形成,活化阶段,C5,C6,膜攻击阶段,MAC形成并插入到细胞内,C9,C9,C9,C9,C9,C9,C9,C9,C9,CH50,在50%溶血附近,“S”形曲线最陡,接近一条直线。在此范围内补体活性稍有变动,溶血程度就有明显变化,即是以50%溶血作为反应的终点比以100%溶血作为终点更为敏感,因而该试验被称为补体50%溶血试验(complement hemolysis 50%),即CH50试验。,CH50测定的临床意义,增高
9、:见于急性炎症,组织损伤和某些恶性肿瘤。减低:免疫复合物性疾病(如肾小球肾炎)、自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等,(二)补体C3检测,是一种由肝脏合成的2-球蛋白。C3在补体系统各成分中含量最多,是经典途径和旁路途径的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。【参考值】成人血清C3:O815gL。,【临床意义】(1)增高:常见于一些急性时相反应,如急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应、急性组织损伤。(2)减低:见于系统性红斑狼疮和类风湿关节炎活动期、大多数肾小球肾炎(如链球菌感染后肾小球炎、狼疮性肾炎、基底膜增殖性肾小球肾炎)
10、、慢性活动性肝炎、慢性肝病、肝硬化、肝坏死、先天性补体缺乏(如遗传性C3缺乏症)等。它们或是由于消耗或丢失过多或是由于合成能力降低造成。,临床常用免疫学检查包括,第一节 体液免疫检测第二节 细胞免疫检测第三节 肿瘤标志物检测第四节 自身抗体检测第五节 感染免疫检测第六节 其他免疫检测,淋巴细胞,T、B、NK细胞基于特异的表面标志和功能,进一步分为若干亚群,一、T细胞分化抗原检测,T细胞膜表面有多种特异性抗原,WHO称其为白细胞分化抗原(cluster differentiation,CD)CD3+代表总T细胞、CD3+/CD4+T辅助细胞、CD3+/CD8+T抑制细胞。应用这些细胞的单克隆抗体
11、与T细胞表面抗原结合后,再与荧光标记二抗(兔或羊抗鼠IgG)反应,在流式细胞仪中计数CD阳性细胞的百分率。,参考值,流式:CD3+61-85CD3+CD4+(Th)28-58CD3+CD8+(Ts)19-48Th/Ts 0.9-2.0,临床意义,CD3+减低 自身免疫性疾病,如SLE,类风湿性关节炎。,SLE,全身性红斑狼疮其名可回溯于十九世纪,发现患者面部赤红的病症像狼咬过的伤痕,而拉丁文中狼为LUPUS狼疮,以后有位皮肤科医师观察到患者鼻梁和两颊有明显的红斑,其英文为ERYTHEMATOSUS红斑,,SLE,之后,发现这种疾病不仅影响皮肤,亦影响全身各个器官,再加上SYSTEMIC全身性从
12、此正名为SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS,全身性红斑狼疮,简称为SLE。,SLE,一种累及多系统、多器官的,具有多种自身抗体的自身免疫性疾病。死亡主要原因:肾脏损害,狼疮脑病,感染网络小说 第一次亲密接触痞子蔡 轻舞飞扬,临床意义,CD3+CD4+减低 恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、艾滋病、免疫抑制剂使用CD3+CD8+减低 自身免疫性疾病、变态反应性疾病Th/Ts 比值增高:自免、病毒感染、变态反应减低:艾滋病(小于0.5),恶性肿瘤进行期和复发时,二、B细胞分化抗原检测,B细胞受抗原刺激后可分化成产生抗体的浆细胞,是体内唯一能产生抗体的细胞。应用CD19、CD20和CD
13、22等单克隆抗体分别与B细胞表面抗原结合,采用流式技术进行检测,分别求出CD19、CD20和CD22等细胞阳性的百分率和B淋巴细胞数。,临床意义,流式 CD19+:11.743.37%升高:急、慢性性淋巴细胞白血病和Burkitt淋巴瘤降低:无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂,临床常用免疫学检查包括,第一节 体液免疫检测第二节 细胞免疫检测第三节 肿瘤标志物检测第四节 自身抗体检测第五节 感染免疫检测第六节 其他免疫检测,肿瘤标志物,肿瘤标志物(tumor marker、TM):在肿瘤发生和发展过程中,由肿瘤细胞所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的,与肿瘤存在相关的物质,存在于血液、细胞、组
14、织液或体液中。,2008年我国卫生事业发展统计公报 卫生部统计信息中心,肿瘤的发展与诊断,10-100 g,榛子大小,针头大小,免疫学方法,早期,亚临床阶段,晚期,1 mg,1 g,1kg,1 g,高灵敏度的肿瘤标志物的测定对肿瘤的早期诊断和治疗方案设计是十分重要的手段,世界卫生组织(WHO)指出:若能早期诊断并及时治疗,90%95%的肿瘤是可以治愈的。,一般肿瘤细胞在癌前病变时,会产生表达肿瘤异常蛋白质,多数肿瘤从癌前病变发展到0.5 cm 以上的占位性病变需要 5 y10 y的时间。如果能够在这段时间内运用肿瘤标志物检测技术,早期检测到患者血液中肿瘤所表达的异常蛋白质,就可以早期发现、早期
15、诊断,并获得早期治疗的良好效果。,临床可检测的肿瘤,肿瘤标记物(无形的肿瘤),恶性肿瘤增长的检测,Tumor mass,1g,10,1mg,106,1g,109,10-100g,1010-11,1kg,1012,肿瘤标记物(无形的肿瘤),临床可检测的肿瘤,肿瘤增长,Tumor cells,Lead time,世界卫生组织(WHO)指出:若能早期诊断并及时治疗,90%95%的肿瘤是可以治愈的。,肿瘤标志物免疫分析,现实的肿瘤标志物灵敏度有限;特异性有限;存在正常异常交错;存在不稳定性与临床表现存在差异,理想的肿瘤标志物肿瘤患者血液中含量明显增高;与肿瘤组织的定位有关;肿瘤标志物的含量与肿瘤的大小
16、分期有关;肿瘤标志物的含量与肿瘤的生长、消退或转移、复发有关;假阴性率与假阳性率低。,TM分类,蛋白质类,如AFP、CEA和PSA等。糖脂类,如CA19-9和CA-50等酶类,如PAP、NSE和AFU等。激素,如HCG、雌激素受体等其它 肿瘤标志物,如核酸、多胺等。,肿瘤标志物检测方法,电化学发光免疫分析系统,临床常用肿瘤标志物,1.蛋白质类肿瘤标志物检测,甲胎蛋白(-fetoprotein,AFP),在胎儿发育早期,由肝脏和卵黄囊合成,出生后一年内降至正常水平。肝细胞或生殖腺胚胎组织恶变后又重新具有分泌AFP的能力。对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值。,参考值,血清 25g/L
17、,临床意义,原发性肝癌患者血清中AFP的含量明显升 高,常300g/L。病毒性肝炎与肝硬化患者血清中AFP可增高,但常300g/L。生殖腺胚胎肿瘤、胃癌或胰腺癌时患者血清中AFP可升高。妊娠时AFP可升高,峰值低于400g/L,若异常升高应考虑胎儿神经管畸形。,癌胚抗原(carcinoembryonic antigen、CEA),早期胎儿的胃肠道及某些组织均有合成CEA的能力胎儿出生后血清 CEA的含量极低,参考值,血清 5g/L,临床意义,升高主要见于胰腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌等消化系统肿瘤及乳腺癌和肺癌。血清CEA连续随访检测,可用于恶性肿瘤治疗后的疗效观察及预后判断。病情好转时,CEA
18、浓度下降,病情加重时可升高。结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病、肺气肿及支气管哮喘等也常见CEA轻度升高。抽烟,前列腺特异性抗原(PSA),前列腺分泌的单链糖蛋白存在于前列腺管道的上皮细胞,前列腺癌时血清水平明显升高总PSA(t-PSA)中,80结合形式(c-PSA),20游离(f-PSA)参考值:t-PSA0.25,临床意义,前列腺癌时60-90患者血清t-PSA明显升高前列腺炎、增生,轻度升高,t-PSA 4.0-10.0g/L t-PSA 4.0-10.0g/L,f-PSA/t-PSA 的比值对诊断更有价值,f-PSA/t-PSA0.1时提示前列腺癌,2.糖脂肿瘤标志物检测,CA125,糖蛋白性肿
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- 临床 常用 免疫学 检查
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