病原微生物标本的采集保存及运输.ppt

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1、病原微生物标本的采集 保存及运输,主要内容,正确采集、保存、运输标本的意义采集标本的用途标本采集的原则常见传染病标本采集的种类各种标本的采样时间和方法标本的保存标本的安全运输标本采集时生物安全,正确采集、保存、运输标本的意义,标本的质量的好坏直接影响实验结果 的正误，而标本的质量与标本的采集、保存、运输密切相关，标本采集、保存不当可导致假阴性、假阳性结果的出现。因此正确地采集、保存、运输标本是保证实验室检验结果准确可靠的前提。,采集标本的用途,可以分为以下两类：一类是用于细菌或病毒病原的检测（病原分离或核酸检测）常用标本如：粪便、咽拭子、血液、气管分泌物、脑脊液等；另一类标本是用于病原抗体检测

2、 标本通常包括血液和脑脊液,标本采集的原则,早期采集 采集时间最好是发病初期、发热期、症状典型期在药物使用前采集无菌采集 采集的标本应无外源性污染。盛装标本的容器应为一次性或经高压灭菌的无菌容器，不能用酸类或消毒剂处理采集的标本要适量且具有代表性安全采集标本 防止标本中病原微生物的传播和自身感染,常见传染病采集标本的种类,呼吸道传播的病毒性疾病（流感、禽流感、甲型H1N1流感、SARS、麻疹、风疹等）,咽拭子 含漱液 痰液血清标本脑脊液尸检组织下呼吸道标本,常见传染病采集标本的种类,肠道传播的病毒性疾病（人手、足、口病）粪便标本 咽拭子标本血液标本 疱疹液 肛拭子标本 尸检标本 脑脊液标本,常

3、见传染病采集标本的种类,经呼吸道传播的细菌性疾病（如流脑）咽拭子脑脊液血液瘀点、瘀斑,常见传染病采集标本的种类,虫媒传播的疾病（乙型脑炎）血液脑脊液,常见传染病采集标本的种类,经消化道传播的细菌性疾病（伤寒、细菌性痢疾、细菌性感染性腹泻、霍乱等)粪便（肛拭子）可疑食物呕吐物血液、脑脊液、尿液（伤寒肠热症）,常见传染病采集标本的种类,人感染猪链球菌病（主要经破损皮肤粘膜传播的疾病）脑脊液血液瘀点、瘀斑胸、腹水,常见标本采集的时间、方法,用于抗原检测的标本 咽拭子采集病人发病3日内的咽拭子标本，用于病原检测（病原分离、核酸检测的阳性率较高）。患者用清水漱口后，用专用采样棉签，令患者仰头张口，将无菌

4、拭子（用无菌盐水浸湿）伸入口腔适度用力拭抹双侧咽后壁部位，应避免触及口腔及舌部；（必要时可使用压舍板），迅速将棉签放入装有3-5ml保存液的15ml外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。采样管外表贴上标签，注明患者的姓名、样本的种类、采样的时间、采样人等基本信息。,悬雍垂,含嗽液：发热72小时内采集。含漱液通过用小体积（5-10ML）的无菌盐水含漱获得，并收集液体到有旋转盖的50ml塑料管离心管中.痰液：只采集重症病人，无时间限制。病人将痰液咳入无菌平皿中，然后用棉签刮取痰液放入含45 ml样本运输液的螺口试管中。病人将痰液咳入无菌、内装45 ml标本运送液、带垫

5、圈的50ml螺口塑料管中。下呼吸道标本（适用于气管插管病人）：只采集重症病人，无时间限制。收集气管吸取液或支气管灌洗液510ml放入无菌、带垫圈的50ml螺口塑料管中。,疱疹液 瘀点瘀斑先用75%的酒精对疱疹液 瘀点瘀斑周围的皮肤进行消毒，待皮肤干燥后，用消毒针将疱疹液 瘀点瘀斑挑破用棉签蘸取液体，迅速将棉签放入内装有3-5ml保存液的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封。可同时采集多个疱疹液 瘀点瘀斑作为一份标本。采样管外表贴上标签，注明患者的姓名、样本的种类、采样的时间、采样人等基本信息。,粪便标本一般采集病人发病3日内的粪便标本，用于病原检测。用药前自然排便的标本，采集脓血粘

6、液部分量2-3g，液体便取絮状物1-2ml，采集后立即放入无菌采便管内（或保存液中)。采样管外表贴上标签，注明患者的姓名、样本的种类、采样的时间、采样人等基本信息。,用于抗原检测的标本,肛拭子标本 采集病人发病3日内的肛拭子标本，用于病原检测。用专用采样棉签，从患儿肛门轻轻插入，适度用力弧型左右擦拭数下，拔出后,迅速将棉签放入装有35ml保存液的15ml外螺旋的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖，并密封，以防干燥。采样管外表贴上标签，注明患者的姓名、样本的种类、采样的时间、采样人等基本信息。,用于抗原检测的标本,尸检标本病人死亡后越早采集越好。采集脑、肝、肺和肠淋巴结等重要组织标本，每

7、一采集部位分别使用单独的消毒器械。每种组织应多部位取材，每部位应取2-3份约5-10g的组织，淋巴结2个，分别置于15ml-50ml无菌的有外螺旋盖的冻存管中，采样管外表贴上标签，注明患者的姓名、样本的种类、采样的时间、采样人等基本信息。,用于抗原检测的标本,脑脊液标本当患者出现神经系统症状时，可采集脑脊液标本，进行病原分离或核酸，抗体检测。采集时间为出现神经系统症状后3天内，采集方法采用腰椎穿刺，采集量为1.0-2.0ml。采集后立即装入无菌带垫圈的冻存管中。采样管外表贴上标签，注明患者的姓名、样本的种类、采样的时间、采样人等基本信息。,用于抗原检测的标本,血液标本作血液病原培养时，严格用无

8、菌穿刺法采肘静脉血，移入无菌的有螺口的抗凝的容器或血培养瓶中送检，或直接接种血平皿。血培养瓶接种比例一般按1：5-1：10，目的是稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。,用于抗体检测的标本,血清单份血清急性期血清 IgM抗体双份血清采集急性期（发病0-7d）和恢复期（发病14-30d）双份配对血清同时检测，如IgG抗体滴度有4倍以上升高才有意义。静脉采集3-5ml全血，置于真空无菌采血管中，自凝后，分离血清，将血清移到2ml外螺旋的血清保存管中，贴上标签，注明患者的姓名，采集急性期和恢复期血清瓶盖最好采用不同的颜色，以便区分。将血清置于-20以下冰箱中冷冻保注意:全血标本不可冷冻,用于抗体检测

9、的标本,脑脊液一般于出现神经症状时采集，查IgM只需一份脑脊液，而查IgG则需收集两次，时间间隔，保存同前所述。,病原微生物标本的保存,病原微生物的保存取决于运送时间的长短及不同病原微生物对干燥、温度、营养、pH值的耐受能力。能确保目标细菌的存活并抑制其他微生物的过度生长，应选择合适的培养基和推荐保存温度。,病原微生物标本的保存,细菌用于分离培养细菌的标本应在运送培养基中运送并保存于合适的温度。分离不同的病原菌使用的运送培养基也不同，一般冷藏运送（奈瑟菌属，流感嗜血杆菌应在3537C保温运送）,病原微生物标本的保存,病毒用于分离病毒的标本，一般应放在保温容器（0C4C）里，最好12小时内送达实

10、验室，最长放置不可超过4天，如不能立即分离病毒时，应将标本-20 C冻存保存，放置不可超过1周。若长期储存，最好在70C冻存。采集病毒拭子推荐使用：灭菌人造纤维拭子（如聚酯纤维）和塑料棒注意 采集咽拭子或肛拭子等用于检测核酸时不能使用棉拭子和木质拭子棒，因为这类材料中含有核酸扩增抑制剂病毒采样液推荐使用：病毒保存液（含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）专用病毒采样盒（海南兴南峰医药器械有限 公司，Tel：0898-66960406，Fax：0898-66960126）,免疫检测标本的保存,用于检测抗原或抗体的标本可在4C8C保存2428h，在20C保存时间更长。检测抗体的血清

11、可在4C保存约一个星期，最长10天；超过一周必须在-20C下冷冻。,检测核酸样品,要求低温快速送检从标本采集到检测的间隔时间要尽可能短，并尽可能将标本处于冷藏状态。检测前保存时间较长时则需冷冻标本防止核酸降解。,标本的运输,标本包装标本必须放在大小合适的带螺旋盖、内有橡胶圈的塑料管里拧紧；将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋里密封，每袋装一份标本；在塑料管上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、姓名；,标本的运输,标本包装填写标本送检登记表（应包括的基本信息：姓名、性别、年龄、职业，现住址、发病日期、标本种类、采集日期、一般的临床症状等），连同塑料管用另一塑料袋密封；将装标本的密封袋放入专

12、用运输箱内，放入冰排，用具吸水和缓冲能力的材料填充同一患者两份以上的密封标本，可放在同一个塑料袋内再次密封。所有容器必须印有生物危险标识运输标本的外包装必须有明确的标签，标明寄送人和接收人的详细联系方式、包装日期和运输日期等,标本应在带有冰袋或者冰排的泡沫箱或保温箱中运输。保证样品运送所需温度的方法为维持4C8C，运送盒中要填充冰袋。为保证-20C条件，在外包装袋内装干冰，但需确保二氧化碳能释放以防爆炸。为保证70C条件，可采用液氮用来储存和运送。标本运送要求专人专车,生物安全,传染性疾病的临床样本中均存在活的病原微生物，在突发公共卫生事件中往往样本的病原体及传播途径不详，因此在采样过程要注意生物防护1、配备具有采集微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备个人防护用品：隔离服、帽、口罩、手套、防护镜、防护器材,生物安全,2、具有掌握相关专业知识和操作技能技术人员3、具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施4、采集样本时要防止刺伤、机械创伤，如发生以外，应及时消毒处理和免疫接种，报告主管领导并进行医学观察,