自身抗体的应用及研究进展.ppt

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1、自身抗体的应用及研究进展,全自动自身抗体分析仪,自动化检测检测定量化单个项目随时检测多个项目同时检测45-90分钟报告结果原厂质控和校正血清精确温度调控系统五点定标、三重检测,风湿病的实验室诊断,血清学检查 自身抗体特异性 非特异的免疫相关指标滑液分析一般的实验室检查项目,常见的自身抗体及其检测方法,(1),(2),常见的自身抗体及其检测方法,抗Ku抗体（Ku),抗Mi抗体（Mi-2）,抗PM-Scl抗体,抗JO-1抗体（JO-1）,多发性肌炎、皮肌炎,抗线粒体抗体M2型（AMA-M2）,原发性胆汁性肝硬化,抗nRNP抗体（U1-snRNP）,混合性结缔组织病（MCTD）,抗Scl-70抗体（

2、Scl-70）,抗着丝点B抗体（CENP-B）,系统性硬化,抗SSB/La抗体,抗SSA/R052抗体,抗SS-A/R060抗体,干燥综合征/系统性红斑狼疮,抗核糖体P蛋白（PO）,抗增殖细胞核抗原抗体（PCNA),抗Sm抗体,抗组蛋白抗体,抗核小体抗体,抗双链DNA抗体IgG抗体,系统性红斑狼疮,项 目 名 称,疾 病,ANA谱17项（免疫印迹法）,(3),常见的自身抗体及其检测方法,(一)类风湿关节炎（RA）,类风湿因子（RF）早期诊断的系列指标抗RA33/36抗体抗核周因子（APF）抗角蛋白抗体（AKA）抗Sa抗体抗环瓜氨酸抗体（抗CCP）,抗角蛋白抗体（AKA）,抗角蛋白抗体(AKA)

3、，1979年Young等发现类风湿性关节炎(RA)血清中有一种能与鼠食管角质层反应的抗体，并对类风湿性关节炎(RA)具有特异性，命名为AKA。1989年Vincent等提出应将AKA更名为抗角质层抗体更为恰当。AKA可以在RA发病以前若干年出现，所以有早期诊断价值。AKA检测方法：取6周龄雄性Wistar大鼠食管中下1/3段作为抗原，做冰冻切片，厚4 m5 m-70 保存备用。加120稀释血清，湿盒内37孵育30分钟，PBS漂洗，吹干，加120稀释的荧光素标记羊抗人IgG，37孵育30分钟，漂洗，吹干，缓冲甘油封片荧光显微镜下观察。判定标准：以角质层出现典型的规则的线状或板层状荧光为阳性。,g

4、ene Filaggrin,类风湿因子（RF）,抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗体,分为IgM、G、A、E型RF在RA中的阳性率为70%，是诊断RA的重要标准之一RF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良。,类风湿因子（RF）,RF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性 SLE 30%SS 70%90%SSc 20%30%MCTD 50%60%非风湿性疾病 5%以下的正常人RF阳性不等于一定就是RARF阴性也不等于一定就不是RA,RF常用检测方法,RF 1：40阳性 乳胶凝集

5、法（测IgM-RF）RF 256 Iu/ml 双抗夹心ElISA法(测总RF）RF-IgG 110IU/ml-IgA 18IU/ml ELISA法-IgM 200IU/ml,RA早期诊断的系列指标,敏感性 特异性抗RA33/36抗体 35.8%99.6%APF 40%-80%70%-90%AKA 40%-55%85%-95%抗Sa抗体 40%-60%98.6%抗CCP 46%-70%96%,抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）,瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关 抗体的主要抗原决定簇对RA诊断具有高度特异性（98%）可在RA早期出现预测早期关节炎发展为RARA关节侵蚀破坏的早期识别及预测,(二)系

6、统性红斑狼疮（SLE）,是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体自身抗体（1）抗核抗体谱ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗体（2）抗磷脂抗体（3）抗组织细胞抗体抗RBC抗体 抗血小板相关抗体 抗神经元抗体（4）其它RF、p-ANCA,抗核抗体（ANA）,定义以细胞核内物质为抗原的抗体临床意义SLE的筛查抗体:95%阳性，但滴度与SLE活动性无相关 阴性基本可排除SLE阳性并非SLE特异 阳性并非风湿病特异:风湿病（SLE、SSc、SS、RA)非风湿性疾病（感染、慢肝、肺纤维化、肿瘤）服用某些药物（INH、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰

7、胺）,抗核抗体（ANA）,方法间接免疫荧光法结果判断:滴度1：100为阳性 常见核型5种 不同核型的临床意义不同,核膜型 与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者,均质型与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关，引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮,斑点型 与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体,核仁型多见于硬皮病,着丝点型多见于CREST综合征,ANA常见五种核型及临床意义,核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者均质型与AHA、抗DNA有关，引起LE形成 主要见于SLE、药物性狼疮斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体核仁型多见于硬皮病着丝点型多见于CREST综

8、合征,ANA检测方法,间接免疫荧光法印迹法ELISA法,抗核抗体谱（ANAs）,定义：以细胞核内物质为抗原的抗体 抗DNA抗体抗ss-DNA 抗ds-DNA 抗组蛋白抗体H1，H2A，H2B，H3，H4 抗非组蛋白抗体抗ENA抗体 抗着丝点抗体 抗核仁抗体 其它线粒体、溶酶体、高尔基体等,抗ds-DNA抗体,临床意义 对SLE的诊断有较高特异性 滴度与SLE活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标 与SLE肾损害有关检测方法 放免法（Farr)敏感，有利于早期预测 检测高亲合力的抗ds-DNA 间接免疫荧光法(IF)特异 ELISA可检测低亲合力的抗ds-DNA 有助于中枢狼疮的病情监测 金标免

9、疫斑点法,抗ENA抗体,抗RNP MCTD100%阳性，且滴度高双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化肾脏保护性抗体？抗Sm SLE的标记性抗体，阳性率30%有助于早期、不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性，但抗RNP阳性可单独存在抗SSA 原发性SS：60-75%SLE:40-50%与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、血管炎、紫癜相关 可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞抗SSB原发性SS：40%，较抗SSA更特异其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS,抗ENA抗体,抗Scl-70 硬皮病标记性抗体抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎标记性抗体抗Rib胞浆抗原核糖体位于胞

10、浆内 临床意义 是SLE的又一特异性抗体，阳性率10-20%多见于SLE活动期 与抗ds-DNA抗体的消长相平行 但不会随病情缓解立即消失 可持续1-2年后才转阴,抗核小体抗体（AnuA）,核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在SLE的诱导和致病中起重要作用对SLE的早期诊断有重要意义比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现阳性率：50%90%特异性98%,(三)皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）,免疫学检查ANAENA抗Jo-1阳性其它检查肌酶谱肌酸磷酸激酶（CPK）:MM-心肌和骨骼肌 MB-心肌 BB-平滑肌和脑内乳酸脱氢酶（LDH）谷草转氨酶（AST

11、）谷丙转氨酶（ALT）碱性磷酸酶（ALP）,(四)干燥综合征（SS）,ANA阳性率40%70%ENA抗SSA抗体阳性率70%96%抗SSB抗体阳性率50%87%抗-Fordrin对于pSS或sSS的诊断有一 定意义，但特异性和敏感性并不理想。RF阳性率75%100%高球蛋白血症WBC下降,(五)系统性硬化病（pSS）,ANA阳性率50%55%ENA抗Scl-70阳性率15%40%抗着丝点抗体(ACA)阳性,(六)混合性结缔组织病（MCTD）,ANA阳性ENA抗RNP高滴度阳性,（七）血管炎,抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）,ANCA的临床意义,c-ANCA和PR3-ANCA 对韦格纳肉芽肿有高

12、度特异性（95%），敏感性80%与病情活动性相关 常作为判断药物疗效和病情复发的指标p-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA具有诊断特异性 阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关 主要与显微镜下多血管炎 坏死性新月体肾小球肾炎 变应性肉芽肿性血管炎 相关,（八）抗磷脂抗体综合征（APS）,是一种非炎症性自身免疫病，临床上以动/静脉血栓形成、习惯性流产和血小板减少等症状为表现，血清中存在抗磷脂抗体血清学检查抗心磷脂抗体（ACA）IgG、IgM、IgA（ELISA）抗2糖蛋白1抗体（抗2-GP1)狼疮抗凝物（LA）凝血酶原时间（PT）激活的部分凝血活酶时间（APTT）白陶土凝集时间（

13、KCT）蛇毒试验（RVVT）,抗磷脂抗体,抗2-GP1抗体比LA和ACA在APS患者中更具有特异性，是导致APS的主要抗体抗2GP1抗体只出现于自身免疫性疾病,而ACA也可出现于一些感染性疾病,如梅毒、AIDS、肝炎、结核等,（九）自身免疫性肝病,抗核抗体（ANA）抗肝细胞膜抗体(抗LMA)抗平滑肌抗体（ASMA）抗肝肾微粒体抗体（抗LKM抗体）抗肝-胰抗体(抗LP抗体)抗可溶性肝细胞抗体（抗SLA）抗线粒体抗体（AMA）,自身免疫性肝炎（AIH）ANA 抗平滑肌抗体（SMA）抗肝肾微粒体抗体原发性胆汁性肝硬化（PBC）抗线粒体抗体（AMA）M2原发性硬化性胆管炎 ANCA阳性,自身免疫性肝病

14、,风湿病的实验室诊断,自身抗体特异性非特异的免疫相关指标一般的实验室检查项目血常规尿常规肝功能肾功能等,注意事项,选择做哪些检查项目时要重点突出 避免“大撒网”解释实验结果时应考虑以下几个问题实验方法本身的敏感性、特异性、可靠性及实验室之间的差异性结合临床应把与之相关的一组实验结果放在一起考虑,全国自身抗体检测质量控制总结,由中华医学会风湿病分会计划 参与质控的医院和检测的项目逐年增多，多为三甲医院,自身抗体的检测对于风湿性疾病的诊断、病情评估、治疗和预后都及其重要。但影响其检测的因素很多，如检测方法、检测技术、操作人员、使用仪器等等，这些都会导致出现假阳性或假阴性，因此对自身抗体进行检测质量控制是非常必要的。,目前自身抗体检测过程中主要存在以下三个问题：1.检测方法的差异2.检测试剂盒不规范3.检测人员的知识水平差异,建议：统一检测方法以统一敏感性和特异性统一所使用的检测试剂盒实验室操作人员应进行技术操作常规和风湿性疾病临床 知识的培训,谢 谢！,