高敏肌钙蛋白T(cTnThs)的检测优势.ppt

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1、高敏肌钙蛋白T(cTnT-hs)的检测优势,XXX,March,2010,Contents,肌钙蛋白概述高敏肌钙蛋白T检测特性高敏肌钙蛋白T与不同肌钙蛋白的比较总结,Contents,肌钙蛋白概述高敏肌钙蛋白T检测特性高敏肌钙蛋白T与不同肌钙蛋白的比较总结,急性心肌梗死(MI)后心脏标志物的分泌心脏标记物升高量与心肌坏死程度成正比,French J and White H Heart 2004;90(1):99106.,肌钙蛋白生理(Troponin),肌纤维由平行的粗丝和细丝组成网状结构。粗丝是肌球蛋白复合体；细 丝由肌动蛋白，原肌球蛋白和肌钙蛋白组成 肌钙蛋白在骨骼肌和心肌中广泛存在:肌钙

2、蛋白C结合Ca离子 存在于骨骼肌和心肌肌钙蛋白I是肌动蛋白抑制亚基 仅存在于心肌中肌钙蛋白T是原肌球蛋白结合亚基,推动肌肉收缩仅存在于心肌中,心 肌 纤 维,肌钙蛋白是特异性最好的心脏标志物,43名马拉松选手奔跑3天后，血液中肌钙蛋白浓度未有升高肌红蛋白和CKMB则有升高1,Clin Chem 43;3:458-466;1997,心肌损伤后，肌钙蛋白浓度升高时间早，持续时间长是理想的心肌损伤标志物,French J and White H Heart 2004;90(1):99106.,*症状出现后时间,Korff S et al,Heart,2006;92:987-993.Wu A et a

3、l,Clin Chem 1998;44:11981208.Katrukha A et al,Clin Chem 1997;43:1379-1385.,肌钙蛋白T的存在形式单一,而肌钙蛋白I有多种存在形式导致肌钙蛋白I检测标准不统一,Troponin I易发生蛋白质水解和酶代谢，降解在体内体外都可发生Troponin T单体是TnT唯一的存在形式Troponin I有多种存在形式:自由的和复合形式蛋白结合形式复合的非肝磷脂形式磷酰基形式,不同的肌钙蛋白I检测方法采用肌钙蛋白I肽链的不同位点,不同肌钙蛋白I形式对不同检测方法的反应各不相同,Wu A et al,Clin Chem 1998;44:

4、1198-1208.,Report 05085(Nine troponin assays)December 2005，https:/www.pasa.nhs.uk/cep,不同检测系统的肌钙蛋白I检测其结果也完全不同,不同检测系统的肌钙蛋白I检测,其结果也完全不同,Report 06020,May 2006，https:/www.pasa.nhs.uk/cep,标准化问题对肌钙蛋白I检测所带来的问题,个体间cTnI检测到标准化较困难且检测水平可能出现20倍以上的差异干扰物可能导致错误的升高或错误地降低分析物浓度，这与反应中干扰的部位有关还可能导致使其他分析物的结果出现误差对于免疫检测的干扰可能

5、导致实验室对患者结果的错误解读，及使医生对患者应用错误的治疗由于cTnI 检测方法多样,医生和实验室人员产生常会出现严重的混淆。接受应用一种个人的Tn检测需要有基于同行评审的文献支持,Datta P et al.Clin chem 1999;56:2266-69.Tate J,Ward G.Clin Biochem Rev.2004;25:105-20;Apple F and Wu A,Clin Chem 2001;47:377-379,.,Contents,肌钙蛋白概述高敏肌钙蛋白T检测特性高敏肌钙蛋白T与不同肌钙蛋白的比较总结,高敏肌钙蛋白T检测特性,肌钙蛋白T的检测历史高敏肌钙蛋白T检测

6、的一致性高敏肌钙蛋白T检测的灵敏度高敏肌钙蛋白T检测的准确性,制作工艺的不断进步，使得肌钙蛋白的检测水平不断提高,制作工艺的不断进步，使得肌钙蛋白的检测水平不断提高,cTnT-hs与第四代肌钙蛋白T比较更低的检测阈值，更精确的检测参考值,cTnT-hs沿用了最先进的电化学发光技术,先进的检测技术 电化学发光技术 电化学发光免疫测定法（Elecsys）发展于 1996年，它在发光反应中加入了电化学反应，是继放射免疫、酶免疫、化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫测定技术，是电化学和免疫测定相结合的产物。世界公认的 最先进 的临床免疫检测技术,肌钙蛋白：先进的电化学发光法,以三明治模式应用2个cTn

7、T特异性鼠单克隆抗体作为抗原结合片段（FAB）。抗体识别位于cTnT分子中部的表达位（氨基酸位125-131和135-147）。检测基于电化学发光免疫分析应用钌的三联啶金属错合物（II）作为标记,高敏肌钙蛋白T：更先进的检测技术,生物素捕获抗体保持不变。检测抗体的基因经过重新设计，用人IgG C1区域取代鼠单克隆抗体FAB片段的连续C1区域，形成人鼠嵌合型检测抗体获益：进一步减少易受嗜异性抗体（HAMAs）的干扰，提高了检测的准确度样本量由15L增加到50L，增加检测抗体的钌浓度，和通过缓冲区优化降低背景信号来实现 获益：提高了分析检测的灵敏度，最低检测阈值由0.01ng/ml降低到0.003

8、ng/ml,高敏肌钙蛋白检测过程,生物素捕获抗体（2.5g/mL），钌标记检测抗体（2.5g/mL），样本在均相中培养4.5分（Elecsys 2010/cobas e 411；STAT应用）或9分钟（Modular E170/cobas e 611；正常应用）。添加链霉亲和素包裹的珠，在第二个4.5或9分钟的培养期内所形成的免疫复合物结合成微粒物。在第二次培养期后，反应混合物被转送入测量单元，其中珠被磁极捕获至电极表面。清洗测量单元去除未绑定的标记并注满包含三丙胺的检测缓冲液。给电极施以电压后，释放出的化学发光可以由光电倍增器检测到。结果通过2点校准曲线确定且具有仪器特异性。,cTnT-hs

9、简单方便的试剂管理,2维条形码自动输入全部信息 试剂联体包 成分独立 稳定好无需配制，打开即用自动开闭试剂瓶盖，有效地防止挥发等,cTnT-hs检测样本的采集,适用多种标本类型 血清 血浆(K2-EDTA,K3-EDTA,肝素理,肝素钠)标本稳定时间 2-8C 24h,-20C 12月.可冰冻一次超长试剂稳定时间,高敏肌钙蛋白T检测特性,肌钙蛋白T的检测历史高敏肌钙蛋白T检测的一致性高敏肌钙蛋白检测灵敏度高高敏肌钙蛋白检测变异小，精确度高,cTnT-hs检测可在多种检测平台上进行,适用于各种型号的电化学发光全自动免疫分析仪Elecsys 2010cobas e 411cobas e 601Mo

10、dular E 170,P/B RegressionY=1.0*X+0.001md(95)=0.008N=200 r=0.9995t=0.9740,cTnT-hs在各种平台均有非常好的检测一致性E2010(STAT)vs.E170(18 min)-range 0-2.5 ng,P/B RegressionY=1.002*X+0.001md(95)=0.007N=195 r=0.9990t=0.9727,cTnT-hs在各种平台均有非常好的检测一致性 E2010(STAT)vs.E170(18 min)-range 0-1 ng/ml,cTnT-hs在所有检测平台均有非常好的检测一致性多中心研究

11、结果,高敏肌钙蛋白T检测特性,肌钙蛋白T的检测历史高敏肌钙蛋白T检测的一致性高敏肌钙蛋白检测灵敏度高高敏肌钙蛋白检测变异小，精确度高,cTnT-hs比第四代肌钙蛋白T有更好的检测灵敏度TnT gen 4th(10%CV)&TnT-hs(99th percentile),507位超过20分钟胸痛患者,APACE study：cTnT-hs 比第四代肌钙蛋白T更早诊断心梗,所有患者,胸痛小于3小时患者,T Reichlin et al.NEJM,Volume 361:858-867,2009,cTnT-hs比第四代肌钙蛋白/CKMB和肌红蛋白更早发现心梗,5468位STEMI患者多中心研究,512

12、4位NSTEMI患者多中心研究,cTnT-hs连续检测可提高NSTEMI检测敏感度在怀疑急性MI患者中，必须结合临床情况进行TNT连续检测,高敏肌钙蛋白基线水平的升高或降低对于区分急性或慢性心肌损伤非常重要动态肌钙蛋白变化对于诊断ACS更为重要,5361位UA患者多中心研究,0,1,10,0,1,2,3,4,5,6,time from admission h,Cut-off ratio,TnT hs,TnT 4,CKMB,cut-off ratio 1,5124位NSTEMI患者多中心研究,Myoglobin,高敏肌钙蛋白T检测特性,肌钙蛋白T的检测历史高敏肌钙蛋白T检测的一致性高敏肌钙蛋白检

13、测灵敏度高高敏肌钙蛋白检测变异小，精确度高,每个心脏标志物都应建立参考决定范围，且是基于正常健康无心脏疾病史的人群（参考人群）对于心脏肌钙蛋白和CK-MB值的升高应定义为测量值超过参考对照组的第99百分位数每个检测第99百分位数变异系数CV应 10%,NACB/IFCC指南对于ACS心脏标志物检测的建议检测99百分位参考值变异系数(CV)10%,Apple F et al.NACB Practice Guidelines in ACS;Circulation 2007,352-355,NACB：National Academy of Clinical Biochemistry美国临床生化科学院

14、 IFCC：international federation of clincal chemistry and laboratory medicine国际临床化学学会,初步结果(445 人)第99百分位数=0.014 ng/ml,cTnT-hs正常人群中第99百分位数:0.014 ng/ml,Confidential:For Internal Use Only,来自546位健康志愿者,TnT-hs检测10%CV为0.013 ng/ml小于99百分位参考值,符合指南对于检测标准的要求,10%CV at 0.013ng/ml,TnT-hs 在第99百分位数的URL值时能小于10%CV(14 pg/

15、ml),cTnT-hs完全满足ESC/ACC对于检测精确性的要求,Roche Elecsys TnT,Siemens Centaur TnI Ultra(2nd),Abbott ARCHITECT,Beckman Access AccuTnI(2nd),Siemens Immulite 2500 STATSiemens Immulite 1000 Turbo,=99th centile URL,=10%CV,0.04,0.03,0.012,0.032,0.04,0.06,0.034,0.03,0.15,0.64,Siemens VISTA(2cd),0.045,0.14,ESC/ACC cri

16、teria met,Yes,No,No,Yes,No,No,Yes,No,0.009,*,*,=Limit of detection,*,0.01,*,0.006,*,0.01,*,0.012,*,0.04,*,From the updated table from IFCC Website,Analytical characteristics of commercial Tn assays as stated by manufacturer(Oct 2008),Ortho Vitros ECi(2nd),*,No,0.003,0.013,0.2,0.42,Roche Elecsys TnT-

17、hs,0.014,0.1,*,*,0.015,0.07,0.04,Siemens Dimension RxL(2cd),No,RiskStratification,Yes,Yes,Yes,No,No,Yes,Yes,Yes,No,No,BioMerieux Vidas TnI-Ultra,Yes,Yes,0.01,*,Yes,No,*,0.02,Abbott AxSYM ADV(2cd),0.04,0.16,No,No,Tosoh AIA 21(2cd),0.06,*,*,0.09,cTnT-hs在所有检测平台均有非常好的检测精确性cobas 6000/E170/e411 and E2010上

18、cTnT-hs批内检测精确性,cTnT-hs在所有检测平台均有非常好的检测精确性 cobas 6000,E170,e411 和E2010上cTnT-hs批间检测精确性,Contents,肌钙蛋白概述高敏肌钙蛋白T检测特性高敏肌钙蛋白T与不同肌钙蛋白的比较小结,肌钙蛋白检测评价标准1,1:A New Season for Cardiac Troponin Assays:Its Time to Keep a Scorecard,Fred S Apple Clinical Chem.2009;55.7,1303-1306,仅有cTnT-hs符合指南要求并达到4级最佳试剂标准,Company/plat

19、form/assaya 99th%CV 99th 10%CV Acceptance Assay g/L g/L g/L designation designation,Contents,肌钙蛋白概述高敏肌钙蛋白T检测特性高敏肌钙蛋白T与第四代肌钙蛋白T的比较高敏肌钙蛋白T与不同肌钙蛋白的比较总结,总结,肌钙蛋白检测已成为各种指南诊断急性心肌梗死的“金标准”罗氏高敏肌钙蛋白T采用最先进的电化学发光免疫检测技术，且在各种平台上均有很好的检测一致性高敏肌钙蛋白T的最低检测浓度仅为0.003pg/ml，是目前灵敏度最佳的肌钙蛋白高敏肌钙蛋白T第99百分位参考值的检测变异系数(CV)10%,完全符合NA

20、CB/IFCC/ESC/ACC的检测要求高敏肌钙蛋白T能比第四代肌钙蛋白更早发现心梗，且连续检测能进一步提高其检测的灵敏度和特异性,Thank you for your attention,Roche Diagnostics(Shanghai)Limited Shanghai 200031China,This presentation is our intellectual property.Without our written consent,it shall neither be copied in any manner,nor used for manufacturing,nor communicated to third parties.,COBAS and LIFE NEEDS ANSWERS are trademarks of Roche,