全国艾滋病检测技术规范》(版)解读.ppt

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1、全国艾滋病检测技术规范（2009年版）解读与实验室规范化管理,内 容,一、艾滋病病毒基本知识二、艾滋病检测技术规范,一、艾滋病病毒基本知识,名词解释HIV病原学HIV生物学性质,艾滋病病毒与艾滋病英文名词,HIV:human immunodeficiency virus，人类免疫缺陷病毒，即艾滋病病毒。AIDS:acquired immunodeficiency syndrome，获得性免疫缺陷综合征，艾滋病是译音。,艾滋病是由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的一种慢性的病死率极高的严重传染病,它的医学全称为获得性免疫缺陷综合症。HIV侵入人体后，直接侵犯CD4+T淋巴细胞，破坏人体的免疫系统，

2、使感染者逐渐丧失对各种疾病的抵抗能力，最后导致各种机会性感染和肿瘤。目前还没有疫苗可以预防，药物只能抑制病毒。注意:艾滋病不要误写为“爱滋病”。,什么是艾滋病？,HIV病原学,HIV属逆转录病毒科慢病毒亚科，属于卫生部颁布的人间传染的病原微生物名录中的危害程度第二类病原微生物，为高致病性病原微生物。HIV分为HIV-1和HIV-2两型，全球85%以上的艾滋病是由HIV-1型引起。HIV-2主要集中在南非等地，在我国远洋船员、归国人员中发现HIV-2。,HIV-1基因具有高度变异性，其在传播过程中，产生很多亚型。目前流行的亚型有11个，为主要群体（M群：A、B、C、D、E、F、G、H、I、J亚型

3、）和次要群体（O群：O亚型）。各亚型间的核苷酸序列差异较大，AH亚型间差异一般在2235之间，而O亚型与AH亚型之间差异高达50以上。HIV-1亚型的鉴定和区分，主要是根据HIV-1 env基因C2-V3区的不同序列来决定。,HIV病毒电镜模式图,HIV感染细胞过程 HIV-1囊膜糖蛋白gp120与靶细胞上的受体CD4结合 gp120的构象发生改变 继而与靶细胞上的辅受体CCR5结合导致gp41的构象改变暴露其融合肽并插入到宿主细胞膜 病毒侵入宿主细胞,1.2:HIV包膜糖蛋白(gp120)粘附到淋巴 细胞表面CD4受体上，并趋化协同受体 靠近,gp120,3.gp120粘附CD4,构象变化使

4、gp120结合CD4分子附近的趋化因子协同受体CCR5.CXCR上,4.5:gp120进一步构象变化使gp41的疏水端插入细胞膜,病毒和细胞膜接触融合,病毒内物质进入细胞,艾滋病病毒感染机理,艾滋病的致病机理,不断破坏T4细胞降低免疫力,Mature forms of HIV in a tissue sample,细胞崩解,HIV生活周期,吸附穿入脱壳生物合成组装成熟和释放,HIV基因组,HIV基因组由两条单股正链 RNA组成。HIV RNA长约9.29.7kb，含3个结构基因（env、gag、pol），6个调节基因（tat、rev、nef、vif、vpu、vpr），5端和3端各含长末端序列。

5、ENV：gp160、gp120、gp41GAG:P66、P51、P31POL：P55、P24、P17,HIV基因组模式图,ENVelope 包膜抗体,gp160-gp41四聚体比 gp41单体浓度高常常被首先检测到的指标之一存在疾病的全部过程与HIV-2 有交叉反应gp120 外膜蛋白+Trimer of gp41 浓度比 gp160低与gp160检测到非常特异 gp41 跨膜蛋白 ENV 印迹最不敏感存在疾病的全部过程和 HIV-2没有交叉反应,但常常和 HIV-1的O亚型有交叉,GAG 抗体(group antigen specific),p24-Core associated prote

6、in 衣壳蛋白常常首先被检测到特异性非常低抗体水平随病程进展降低p17-Matrix associated protein 内膜蛋白诊断价值低特异性低p55-Precursor p24+p17+LMW(9 kd+5 kd),POL 抗体,p66 and p51 逆转录酶p66比 p51通常较多出现通常在发现ENV和GAG30-60天后能检测到p66p66 与HIV-2很容易有交叉反应p66抗体水平随病程进展降低p51 抗体诊断价值小p31 内切酶 常常与p66同时检测到p31抗体水平随病程进展降低容易和GAG片段p32混淆,HIV对外界环境中理、化因素抵抗力远低于HBV,常用消毒剂均可使其失活

7、。0.5%次氯酸钠或70%酒精1min即可使HIV失活。HIV离体干燥环境下2至7min即可失活。HIV对热敏感，WHO推荐100 20分钟灭活HIV。,HIV生物学性质,HIV感染自然史,急性期无症状期持续性淋巴结肿大期临床期（艾滋病期）,急性期症状,50%以上的患者在感染后2周到2个月出现。传染性单核细胞增多症样表现：发热、皮疹、关节痛、头痛、咽痛、乏力、淋巴结肿大、出汗、恶心、呕吐、腹泻。发生率10-15%。通常在2-4周内自行缓解。,无症状期,无症状期一般2-10年最早6个月性传播时，平均8年HIV-2感染时较晚，最长可达20年一旦发病，通常在18个月内死亡潜伏期的长短与机体免疫状态和

8、感染病毒的量有关,艾滋病的临床表现,机会性感染肿瘤艾滋病痴呆综合征消耗综合症,机会感染,所谓机会感染就是说当人体的免疫功能下降时，原本已经寄生在人体中一些非致病菌可以造成的疾病，或者是对致病菌的易感性增加所造成的机会感染，而这种感染，对于一个具有正常免疫功能的人来说，不会造成疾病状态。主要病原：病毒感染，卡氏肺孢子虫肺炎，分支杆菌感染，霉菌感染，细菌感染，弓形体病，隐孢子虫病。,艾滋病检测实验室管理,实验室（Laboratory）,实验室：也称试验室，是进行科学实验或试验的场所。根据学科领域的不同，实验室可分为生物实验室、化学实验室和物理学实验室。病原微生物实验室：指从事传染性物质操作活动的实

9、验室，主要有研究用实验室、临床检验实验室、公共卫生实验室、传染病监测实验室等。,艾滋病检测实验室,是指对人体血液、其他体液、组织器官、血液衍生物等进行艾滋病病毒、艾滋病病毒抗体及相关免疫指标检测的所有实验室的统称。艾滋病检测包括监测、检验检疫、自愿咨询检测、临床诊断、血液及血液制品筛查,艾滋病检测实验室要素人员要求试剂要求 样本要求 技术要求 环境要求设备要求,实验室管理原则,在不同等级的实验室，建立统一的实验室操作规程和生物安全要求标准根据不同的生物安全级别，实验室装备必要的实验与防护设备实验室实行严格的科学化管理目的：按照实验技术、科学规律，利用物理、化学、生物、辐射等各种方法，得到一个接

10、近真值的一个近似值。,实验室规范化管理依据,1、国家实验室认可和计量认证要求2、实验室生物安全通用要求 GB19489-2004）3、微生物和生物医学实验室生物安全通用准则(WS233-2002),2002.4、生物安全实验室建设技术规范（GB50346-2004）,实验室规范化管理依据,5、医学实验室 质量和能力的专用要求6、检测和校准实验室能力的通用要求7、全国艾滋病检测工作管理办法（2006)8、全国艾滋病检测技术规范（2009),艾滋病检测工作管理历程,1990.全国HIV检测管理规范（试行）1997.9.全国艾滋病检测工作规范2003.5.全国艾滋病检测技术规范（试行）“规范”200

11、4.8 全国艾滋病检测技术规范2006.6 全国艾滋病检测工作管理办法-“办法”（卫生部）,“全国艾滋病检测工作管理办法”,使AIDS检测工作列为法制管理，其意义是通过HIV检测实验室实行全面的准入制度（实验室准入、人员准入、试剂准入、设备准入）、分类分级网络化管理、检测工作质量管理、实验室生物安全和监督管理，真正确保实验室HIV检测的正确性，确保全国HIV检测工作管理的科学化、标准化、法制化，人身安全和环境保证。,全国艾滋病检测技术规范版本,2003年5月试行2004年6月修订2004年8月正式版（卫生部疾病控制司2004年9月7日下发）2009年9月修订本2009年12月修订版,目 录（2

12、004年版）第一章 样品的采集和处理.1第二章 HIV抗体检测.3第三章 HIV核酸定性检测13 第四章 HIV RNA定量测定（病毒载量测定）.17第五章 CD4+和CD8+T淋巴细胞检测 22第六章 HIV抗原检测26第七章 艾滋病实验室安全防护和职业暴露预防29第八章 艾滋病实验室质量管理39第九章 艾滋病实验室质量考评办法46第十章 HIV诊断试剂临床质量评估方案 50,目 录（2004年版）附表1 HIV抗体筛查报告 53附表2 HIV抗体复检化验单 54附表3 HIV抗体确认检测报告单.55附表4 HIV感染流行病学监测疫情报告单 56附表5 HIV抗体替代策略检测报告单.57附表

13、6 HIV抗体检测数季报表 58附表7 艾滋病职业暴露个案登记表 59附表8 艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表 62,2009版修改、增补和完善内容,（1）在样品的采集和处理中，增加了滤纸干血斑样品、快速检测样品的采集和处理，用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定样品、尿液和唾液样品的采集和处理；（2）在HIV抗体检测中，增加了免疫荧光法和化学发光法，进一步明确了不同情况下的检测策略；,（3）在HIV核酸检测中，增加了HIV感染产妇所生婴儿HIV感染早期诊断检测流程和适用于窗口期的集合核酸检测方法；（4）根据临床治疗需求，增加了HIV-1的耐药检测；（5）进一步完善了艾滋病检测实验室安全防护

14、和艾滋病检测实验室的质量管理，使其更加符合目前艾滋病防治工作的需求，更加具有可操作性；（6）考虑到技术发展和新的需求，增加了HIV-1新近感染检测和HIV-1的分离培养技术。,2009版修改、增补和完善内容,全国艾滋病检测技术规范（2009修订版）,本规范自发布之日起实施，同时终止全国艾滋病检测技术规范(2004年版)本规范适用于全国所有的艾滋病检测实验室起草单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心,目 录（2009年修订版）第一章 样品的采集和处理.1第二章 HIV抗体检测.5第三章 HIV-1抗原检测.19第四章 HIV核酸检测.21第五章 HIV-1耐药检测.31第六章 CD4+

15、和CD8+T淋巴细胞检测 35第七章 HIV-1的分离培养 39第八章 实验室安全安全41第九章 艾滋病检测实验室质量管理50第九章 艾滋病实验室质量考评办法46,目 录（2009年修订版）附表1 HIV抗体筛查报告 59附表2 HIV抗体复检检测单 60附表3 HIV抗体确证检测报告单.61附表4 HIV抗体替代策略检测报告单.62附表5 流行病学监测HIV抗体检测报告单 63附表6 艾滋病病毒抗体检测数及阳性人数统计报表 64附表7 CD4+T淋巴细胞检测结果报告 65附表8 HIV-1耐药基因型检测报告.66附表9 艾滋病职业暴露个案登记表 68附表10艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总

16、表 71,第一章 样品的采集和处理,1 范围 2 规范性引用文件3 样品种类及相应的用途4 操作步骤4.1 采样前准备4.2 采集和处理样品4.3 样品的保存4.4 样品的运送4.5 样品的接收,第二章 HIV抗体检测,1 范围2 规范性引用文件3 HIV抗体检测实验室要求4 HIV抗体检测的目的和要点4.1 HIV抗体检测的目的4.2 HIV抗体检测的要点5 以诊断为目的的检测策略5.1 常规HIV抗体检测的方法和程序5.2 其它HIV抗体检测的方法和程序,第二章 HIV抗体检测,6 以监测为目的的检测策略6.1 适用范围6.2 检测程序及结果报告7 以血液筛查为目的的检测策略8 艾滋病检测

17、实验室检测信息上报9 质量控制9.1 抗体检测的统计学室内质量控制9.2 快速检测质控,第三章 HIV-1抗原检测,1 范围2 规范性引用文件3 HIV1P24抗原检测的意义4 实验室要求5 检测方法及程序5.1 试剂5.2 样品5.3 定性检测5.4 定量检测5.5 结果报告和解释 6 质量保证和质量控制,第四章 HIV核酸检测,1 范围2 规范性引用文件3 核酸检测的意义3.1 早期诊断3.2 疑难样本的辅助诊断3.3 遗传变异监测3.4 耐药性监测3.5 病程监控及预测3.6 指导抗病毒治疗及疗效判定4 HIV核酸检测实验室要求4.1 实验室分区和功能4.2 实验室人员和要求4.3 实验

18、室设施和设备,第四章 HIV核酸检测,4.4 实验室生物安全4.5 防止实验室核酸残余（Carry-over）污染措施4.6 废弃物处理制度5 HIV核酸检测方法及程序5.1 HIV核酸定性检测5.2 HIV核酸定量检测5.3 集合核酸定性检测（Pooling PCR）5.4 婴幼儿HIV感染核酸检测6 质量保证和质量控制6.1 实验室分区和环境6.2 仪器设备质量控制6.3 检测过程质量控制6.4 外部质量控制,第六章 CD4+和CD8+T淋巴细胞检测,1 范围2 规范性引用文件3 CD4+和CD8+T淋巴细胞检测的意义4 CD4+和CD8+T淋巴细胞检测实验室要求4.1 人员4.2 设施和

19、设备4.3 功能分区5 常规CD4+和CD8+T淋巴细胞检测的方法和程序5.1 样品采集、运输和接收5.2 方法5.3 实验资料的记录5.4 结果报告6 质量控制,第八章 实验室生物安全,1 范围2 规范性引用文件3 HIV的生物危害4 HIV相关检测的生物安全级别5 生物安全保证措施6 污染物处理7 意外事故处理8 职业暴露后预防,第九章 艾滋病检测实验室质量管理,1 范围2 规范性引用文件3 质量保证(8个方面)4 质量控制5 质量评价5.1 内部质量评价5.2 外部质量评价6 诊断试剂临床质量评估,一、筛查实验室人员要求,至少由3名医技人员，其中1名中级卫生技术职称具有2年以上从事病毒性

20、疾病血清学检测工作经验接受过省级以上艾滋病检测技术和生物安全培训获得培训证书。-卫生部全国艾滋病检测工作管理办法,实验室人员和要求,进行HIV/AIDS患者CD4+和CD8+T淋巴细胞检测的人员须具有上岗资格，并接受过省级以上艾滋病实验室安全培训、检测技术、质量控制和仪器厂家提供的培训。进行核酸检测的人员须具有艾滋病检测实验室的上岗资格，及厂家的培训。进行HIV-1耐药基因型检测的人员须具有国家级实验操作技术培训合格证。,二、HIV检测试剂要求,经国家食品药品监督管理局（SFDA）注册批准有效期内的试剂中检所：批批检合格（酶联免疫试剂）CDC：临床评估质量优良采供血机构：必须使用HIV-1/2

21、,三、样品的采集和处理,3 样品种类及相应的用途3.1 全血、血清、血浆、唾液、尿液以及DBS样品可用于HIV抗体检测。3.2 抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。3.3 血浆可用于HIV-1病毒载量、基因型及耐药检测。DBS样品可用于HIV-1基因型及耐药检测。3.4 全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞（PBMC）及DBS样品可用于HIV核酸的定性检测。,4.1.1 样品的编码和记录,4.1.2 应制定样品编码的标准操作程序（SOP），规定样品编码的原则和方法，为样品制定唯一性编码（编号），保证其唯一性。4.1.3 采血前，先对装有样品的离心管或滤纸进行标记，核对后编码。

22、要将标签贴在试管的侧面，最好使用预先印制好的、专门用于冷冻储存的耐低温标签。4.1.4 应使用专门的样品记录本或登记表记录样品，同时录入电脑保存。,4.2 采集和处理样品,4.2.1 血液4.2.1.1 抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂（EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠）的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀68次，备用。4.2.1.2 末梢全血：4.2.1.3 血浆：将采集的抗凝全血15003000r/min离心15min，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。4.2.1.4 血清：根据需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽

23、取510ml静脉血，室温下自然放置12h，待血液凝固、血块收缩后再用15003000r/min离心15min，吸出血清，置于合适的容器中，备用。,复检样品的保存,4.3.4 艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样品，无论确证结果如何，均应将剩余的样品保存至少10年，特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。,四、检测方法的要求,以诊断为目的的检测策略 常规HIV抗体检测的方法和程序：分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验以监测为目的的检测策略确证流程,确证流程,1、使用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如呈阴性反应，报告HIV抗体阴性（）；2、如呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性（）

24、；3、如果不是阴性反应，但又不满足阳性判断标准，则报告HIV抗体不确定（）。结合流行病学资料，在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。,五、环境要求-房屋与设备,筛查实验室1、建筑条件：实验室或检测区域应分为清洁区，半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。建筑条件是基础、安全意识是关键。掌握原则、灵活运用；发挥资源、联合检测；独立式的、混合式的

25、(共用半污染区）、开放式的3、仪器设备：酶标读数仪、洗板机、加样器（仪）、普通冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。(标本保存和使用与安全),三、网络实验室管理-分级管理国家艾滋病参比实验室省级艾滋病确认中心实验室艾滋病确认实验室艾滋病筛查中心实验室艾滋病筛查实验室（艾滋病筛查检测点）,陕西省实验室网络及其建设,20052009年网络实验室建设情况,注：西安、咸阳和安康市CDC为确证实验室，同时承担筛查中心实验室的工作职能。,艾滋病检测筛查实验室的基本标准,人员条件 至少由3名医技人员组成，具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的

26、技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级或省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。建筑条件 实验室或检测区域应分为清洁区，半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。（物流）仪器设备条件 配备艾滋病抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、加样器（仪）、普通冰箱、低温冰箱、离心机、温箱或水浴箱、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。(标本保存和使用与安全),结束语,一个良好实验室的质量保证取决于 严格的管理制度 高素质的专业人员 规范的操作技术 标准的环境设施,陕西省CDC关于HIV检测文件,1、陕西省疾病预防控制

27、中心关于重申疾病控制机构艾滋病防治法定职责的通知（陕疾控艾防字200923号）2、陕西省疾病预防控制中心关于艾滋病治疗及采血法律授权的报告（陕疾控艾防字200941号）3、陕西省疾病预防控制中心关于设立艾滋病检测点的补充意见（陕疾控艾防字200942号）4、陕西省疾病预防控制中心关于修订艾滋病确证检测与报告程序的通知（陕疾控艾防字200972号）,艾滋病检测职责（省CDC文件）,陕西省疾病预防控制中心关于重申疾病控制机构艾滋病防治法定职责的通知（陕疾控艾防字200923号）1.艾滋病筛查实验室开展艾滋病病毒抗体筛查应出具筛查阴性和待复查报告，并将HIV抗体筛查呈阳性反应的样品尽快送本市艾滋病筛

28、查中心实验室或确证实验室复检。2.艾滋病筛查中心实验室负责对本辖区HIV抗体筛查实验室或检测点发现的初检阳性标本的复检工作，出具复检阴性报告和待复查报告，并将待确认样品送辖区确证实验室确认。,艾滋病检测职责（省CDC文件）,3.艾滋病确证实验室负责本辖区内的艾滋病病毒抗体的确证实验，出具HIV抗体阳性、阴性、不确定检验报告；负责辖区内艾滋病检测实验室网络建设的技术指导与和质量控制，开展CD4淋巴细胞和病毒载量检测工作。4.西安、咸阳、安康辖区内的医疗卫生单位和个人的艾滋病确认和CD+4 T淋巴细胞、病毒载量检测工作分别由西安、咸阳、安康市艾滋病确证试验室承担。其他市及杨陵区此类工作由省确证中心

29、实验室承担。,艾滋病确证检测与报告程序（省CDC文件）,陕西省疾病预防控制中心关于修订艾滋病确证检测与报告程序的通知（陕疾控艾防字200972号）一、样本接收 1.本实验室接收医疗卫生机构以检测HIV抗体为目的的全血、血清和血浆等样本，以及以检测CD4细胞和HIV病毒载量为目的使用EDTA做抗凝剂的抗凝全血。由于CD4细胞检测对病人样本采集时间有严格的时限要求，因此在采集CD4细胞检测样本前，需与本实验室提前预约。,样本编号与编号规则,2.各送检机构应对送检样本与送检单统一编号并留档。没有填写样本送检单，或送检单上编号信息与样本储存管上的编号信息不一致的样本，以及送检单不加盖公章的样本将不予接

30、收。同一被检者的样本复检化验单编号须与样本管编号统一，编号规则为“市名首字+年份+样本序列号”，如汉中市2009年5月15日送检的本年度第122份HIV抗体初筛阳性复检样本，则编号为“汉2009-122”。,复查程序与要求,3.按照HIV检测技术规范，HIV抗体初筛阳性样本，需经市级艾滋病筛查中心实验室复检。复检阳性者，市级艾滋病筛查中心实验室通知送样单位重新采集样本分2管保存。一管供市级艾滋病筛查中心实验室再次复检，阳性者由筛查中心实验室填写“HIV抗体复检化验单”，连同另一管全血血样送省艾滋病确证中心实验室确认。,接收样样本要求,4.本实验室不接收个人送检样本（即在外面已经采集好的血液）。

31、个人检测需要被检者本人亲自来实验室，出示身份证并核对无误后进行采血，登记相关信息，存留身份证复印件。5.本实验室不接收不符合相应检测标准要求的样本。,报告发放,1.报告时限：实验室在接到合格的检测样本后，HIV抗体检测在10个工作日内、CD4淋巴细胞检测在一周内、HIV病毒载量检测根据工作安排统一出具检测报告。2.报告授权：检测报告单由检测者签名，至少有中级职称或以上的确证中心实验室技术人员依据收样记录、检测步骤及检测结果等原始记录进行审核并签名。艾滋病抗体阴性确证报告、CD4淋巴细胞和病毒载量报告需由科主任签发；HIV抗体阳性确证报告需由中心领导签发。,报告领取,4.报告领取：送检单位和被检

32、测者本人应按预约时间及时与本实验室联系，领取检测报告。对未按预约时间领取报告者，本实验室将根据送检单位或被检测者本人预留的联系电话通知。对预留联系电话号码不实、2次电话联系不上、送检单位和被检者本人又不主动联系者，本中心不再负责。,结果告知,按照“谁送样谁告知”的原则，实验室向送检单位出具显示送检样本编号的HIV抗体确证检测报告单，由送检单位根据送检样本编号与被检者姓名等个人信息，核准无误后，填写“HIV抗体确证检测结果通知单”，附加盖本单位公章的“陕西省疾病预防控制中心HIV抗体确证检测报告单”复印件，将检测结果告知被检者本人或监护人，同时做好相应的检测后咨询工作。送检单位的结果通知单存联应与本中心的HIV抗体确证检测报告单原件一并归档，留存备查。,检测报告,HIV抗体复检化验单HIV抗体确证检测报告单HIV抗体确证检测结果通知单,