维生素类药物的分析.ppt

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1、第八章,维生素类药物的分析,维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。人体不能合成维生素。,第一节 概述,VitA、D2、D3、E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺,VitM,VitPP,-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯,R:,第二节 维生素A,为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯,（一）,具有UV吸收,存在多种立体异构化合物,维生素A 325.5 100%新维生素Aa 328 75%新维生素Ab 320.5 24%新维生素Ac 310.5 15%异维生素Aa 323 21%异维

2、生素Ab 324 24%,相对生物效价,VitA2,VitA3,易发生脱氢、脱水、聚合反应,鲸醇,或有金属离子存在时氧化,环氧化物,VitA醛,VitA酸,CHCl3,不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等,条件 无水无醇,CHCl3,蓝色,紫红,（BP（1998）,max为326nm一个吸收峰,max为350390nm三个吸收峰,去水VitA（VitA3）,VitA,USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑,立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A（VitA2）去水维生素A（VitA3）,UV法,（一）,三点校正法1.条件：（1）杂质的吸收在31

3、0340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。,2.波长的选择：（1）1 VitA的max（328nm）（2）2 3 分别在1的两侧各选一点,测定对象 VitA醋酸酯,第一法 等波长差法,第二法 等吸收度法(皂化法),测定对象 VitA醇,测定法（1）基本步骤:第一步 A选择选择依据：所选A值中杂质的干扰已基本消除,注意：C 为混合样品的浓度,第二步 求,第三步 求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,方法：,（2）,第一法,维生素A醋酸酯,判断 是否在326329nm之间,在326329nm之间,改用第二法,是,否,求算 并与规定值比

4、较,规定值 差值,判断差值是否超过规定值的,有一个以上超过,无超过,计算 A328（校正）,用A328计算,第二法,第二法,VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为,A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216,A300/A328：0.555A

5、316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299,求本品中维生素A的含量？,A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+0.010.01 0+0.02+0.04,=,适用于维生素A醇,（等吸收度法）,第一法无法消除杂质干扰时用此法,皂化法、6/7A法,（3）第二法,水溶性,脂溶性,判断max是否在323327nm之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算

6、,是,否,判断 A300/A325 是否大于0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算A325(校正),0,3%,3%,三氯化锑比色法,（二）,优点 简便 快速,max 618nm620nm,标准曲线法,苯并二氢吡喃醇,第三节 维生素E,*,*,*,生物效价 右旋体：消旋体=1.4：10,（天然品）,（合成品）,dl生育酚醋酸酯,一、结构与性质,苯环+二氢吡喃环+饱和烃链,1、易溶于有机溶剂，不溶于水,2、UV,3、酯键 易水解,（一）,硝酸反应,二、鉴别,取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75加热15分钟，溶液应显橙红色。,（橙红色）,生育红,

7、生育酚,HNO3,强氧化剂,（二）三氯化铁联吡啶反应,生育酚,对-生育醌,弱氧化剂,红色,=41.045.5,max=284nm,min=254nm,0.01%无水乙醇中,（三）UV法,维生素EUV图,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷-乙醚（4：1）,显色剂 硫酸（105 5）,VitE Rf=0.7,（四）TLC法,游离生育酚,硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄灰紫）,利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈,三、检查,（一）原理,（二）试剂,（M生育酚=430.8）,例,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫

8、酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。(2010年版药典规定，天然型检查此项，合成型是以有关物质项来采用HPLC法）,2.15,（三）限量,药典规定,消耗硫酸铈液（0.01mol/L）1.0ml,设：应消耗硫酸铈液 V ml,0.011.0 实际浓度 V,若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量,例 Ce(SO4)2=0.01020mol/L,四、含量测定,GC法,（一）,GC特点,1、,选择性好灵敏度高速度快分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,载气N2固定液硅酮（OV-17）担体硅藻土或高分子多孔小球柱温265检测器氢火焰离子化

9、检测器(FID)内标正三十二烷 n 500（填充柱）或5000（毛细管柱）R2,内标法加校正因子,内标法,供试液（样品+内标）,内标物,对照液（对照+内标）,校正因子：,实际工作中的计算方法,例,内标液 取正三十二烷加正己烷溶解 并稀释成1.0mg/ml溶液,对照液 精密称取VitE对照品0.2011g 置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内 标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 13ul注入GC仪，测定，计算,供试液 精密称取供试品0.1998g置棕 色具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取13ul 注入GC仪，测定，计算,对照液,供试液,本品含C31H52O3应为96.0 10

10、2.0%,BP GC 内标 正三十二烷 R1.4,USP GC 内标 十六酸十六醇酯 R1.0,JP HPLC 外标 dl生育酚 R1.4,利用生育酚的易氧化性,还原型,氧化型,二苯胺（亮黄灰紫）,（二）铈量法,防止Ce(SO4)2的水解减慢生育酚被O2氧化速度,C、酸性条件,Ce(SO4)2易溶于水生育酚易溶于醇,B、溶剂,分子量较大，反应慢 易被O2氧化,A、反应速度,MVitE=472,样品 dl生育酚固定相十八烷基硅烷键合硅胶流动相甲醇-水（49：1）检测波长292nm R2.6 RSD0.8%,测定对象血清中VitA和VitE固定相十八烷基硅烷键合硅胶流动相甲醇-水（96：4）检测波

11、长 8前330nm 8后292nm,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),HCl,Cl-,第四节 维生素B1,（一）溶解性,1、易溶于水2、水溶液呈酸性,（二）UV,共轭双键,max=246nm,一、结构与性质,（三）硫色素反应,嘧啶环 伯氨,噻唑环 季铵,1、可与酸成盐,2、与生物碱,3、含量测定 非水碱量法,（四）,碱性,ChP 2010,二、鉴别试验,（一）硫色素反应,鉴别（1）取本品约5 mg,加氢氧化钠试液2.5 ml溶解后，加铁氰化钾试液0.5 ml与正丁醇5 ml，强力振摇2分钟，放置使分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光；加酸使成酸性，荧光即消失；再加碱使成碱性，荧光有显出。,硫色素,

12、2H,VitB1,（二）沉淀反应,S元素反应,Cl-反应,（三）其他反应,三、含量测定,（一）非水溶液滴定法(ChP 2010),【含量测定】取本品约0.12g，精密称定，加冰醋酸20ml微热使溶解，放冷至室温，加醋酐30ml，照电位滴定法（附录 A），用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于16.86mg的 C12H17ClN4OSHCl。,维生素B1的含量测定,（二）UV法,维生素B1片的含量测定,=421,（每片）相当于标示量的%=,A=ECL,g/100ml,ChP 2010 片剂、注射剂,（每ml）相当于标示

13、量的%=,规格g/ml,ml,准确度高灵敏度低操作繁琐设备简单,（三）硅钨酸重量法,2337.27,3479.22,取本品约50mg，精密称定，加水50ml溶解后，加盐酸2ml，煮沸，立即滴加硅钨酸试液4ml，继续煮沸2分钟，用80恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（120）20ml分次洗涤，再用水10ml洗涤1次，最后用丙酮洗涤2次，每次5ml，在80干燥至恒重，精密称定，所得重量与0.1939相乘，即得,例,精密称取本品0.0519g，加水50 ml溶解，加盐酸2ml煮沸，立即滴加硅钨酸试液4 ml，继续煮沸2分钟，用80恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（120）

14、20 ml 分次洗涤，再用水10ml 洗涤1次，后用丙酮洗涤2次，每次5ml。在80干燥至恒重，称得沉淀重量为0.2557g。求本品的含量按干燥品计算为多少？(本品干燥失重项下测定结果为3.73%),A.取样量50mg 提高灵敏度,B.80 保持4个H2O,C.HCl 增大沉淀颗粒,D.硅钨酸：VitB1=8：1 使沉淀完全,E.硅钨酸边搅拌边缓慢加入 增大沉淀颗粒,NaOH,（四）硫色素荧光法,激发波长365nm发射波长435nm,+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇,+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇,S,d,A,b,对照液,供试液,（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代

15、谢产物不干扰，适用于 体液分析,L抗坏血酸,第五节 维生素C,二烯醇结构,二酮基结构,二烯醇结构,有活性,有活性,无活性,糖类的显色反应,结构与糖类相似,50,C3OH的pKa=4.17,C2OH的pKa=11.57,一元酸,L(+)抗坏血酸活性最强,手性C（C4、C5）,*,*,与碱反应,（七）UV特征,1、与AgNO3反应,2、与2，6-二氯靛酚反应,(ChP2010),氧化型,玫瑰红色,(ChP2010),（玫瑰色）,（无色）,3、与碱性酒石酸铜反应,ChP2010(维生素C钠鉴别）,4、与KMnO4反应,USP,BP,0.01mol/L HCl,指示剂 淀粉指示液,取本品约0.2g，精

16、密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,（1）酸性环境 d.HCl,（2）新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,赶走水中O2,减少O2的干扰,（4）附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,USP,JP,（2）快速滴定 2min内,（1）酸性环境 HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多 氧化力较强

17、,1、HPLC的优点,灵敏度高,选择性高,分离分析同步,微量分析,干扰少,快速,2、HPLC法分离VitC常用方法及测 定对象,对象 制剂、生物样品、果汁,方法 离子交换色谱法 离子对色谱法 分配色谱法（正、反相）,血、尿、组织、细胞等,例,多种维生素片中VitA、VitB1、VitB2、VitB6、烟酰胺、VitC、VitE的含量测定,色谱柱 ODS流动相 A、水-甲醇（4：1）B、甲醇（梯度洗脱）抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠,水溶性维生素 离子对色谱法（樟脑磺酸）内标法+校正因子 内标物苯酚,脂溶性维生素 外标法,例1在三氯醋酸或盐酸存在下，经 水解、脱羧、失水后，加入吡 咯即产生蓝色产物的药

18、物应是 A.氯氮卓 B.维生素A C.普鲁卡因 D.盐酸吗啡 E.维生素C,例2中国药典（2010年版）采用以下何法测定维生素E含量 A.酸碱滴定法 B.氧化还原法 C.紫外分光光度法 D.气相色谱法 E.非水滴定法,例3中国药典（2005年版）采用气相色谱法测定维生素E含量，内标物质为 A.正二十二烷 B.正二十六烷 C.正三十烷 D.正三十二烷 E.正三十六烷,例4.下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是 A.维生素A B.维生素B1 C.维生素C D.维生素D E.维生素E,例5既具有酸性又具有还原性的药物是 A.维生素A B.咖啡因 C.苯巴比妥 D.氯丙嗪 E

19、.维生素C,例6.维生素C的鉴别反应，常采用的试剂有 A.碱性酒石酸铜 B.硝酸银 C.碘化铋钾 D.乙酰丙酮 E.三氯醋酸和吡咯,例7.测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了 A.保持维生素C的稳定 B.增加维生素C的溶解度 C.使反应完全 D.加快反应速度 E.消除注射液中抗氧剂的干扰,例8.能发生硫色素特征反应的药物是 A.维生素A B.维生素B1 C.维生素C D.维生素E E.烟酸,例9使用碘量法测定维生素C的含量,已知维生素C的分子量为176.13，每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于维生素C的量为 A.17.61mg B.8.806mg C.176.

20、1mg D.88.06mg E.1.761mg,例10.可发生以下反应或现象的药物为 A.维生素B1 B.维生素C C.两者均能 D.两者均不能1.与碘化汞钾生成黄色沉淀 2.麦芽酚反应 3.在乙醚中不溶 4.与2,6-二氯靛酚反应使颜色消失 5.硫色素反应,A,D,C,B,A,例11维生素A的鉴别试验为 A.三氯化铁反应 B.硫酸锑反应 C.2,6-二氯靛酚反应 D.三氯化锑反应 E.间二硝基苯的碱性乙醇液反应,例12中国药典（2000年版）规定维生素A的测定采用紫外分光光度法（三点校正法），此法又分为 A等波长差法 B等吸收度法 C6/7 A法 D差示分光法 E双波长法,例13维生素E的鉴

21、别试验有 A硫色素反应 B硝酸氧化呈色反应 C硫酸-乙醇呈色反应 D碱性水解后加三氯化铁乙醇液与 2,2-联吡啶乙醇液呈色反应 EMarquis反应,例14.下面哪些描述适用于维生素A A.分子具有长二烯醇侧链，易被氧化 B.具有较长的全反式共轭多烯结构 C.含酯键，经水解后产生苯并二氢吡喃衍 生物，易被氧化 D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰色，很快转变为紫红色 E.样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加热后，呈橙红色,维生素A与 反应即显蓝色，渐变成紫红色；反应需在 条件下进行。（）维生素A分子中由于具有共轭多烯侧链，因而其性质很稳定，不易被氧化变质。,三氯化锑,无水,维生素E在酸性或碱性溶液

22、中加热可水解生成游离，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。,生育酚,维生素B1 的噻唑环在 介质中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合环合，然后经 等氧化剂氧化生成具有荧光的，加 荧光消失，加 荧光又显出；此反应称为 反应。,碱性,铁氰化钾,硫色素,酸,碱,硫色素,维生素C是 元弱酸，具有强 性，易被氧化剂氧化，常用作其它制剂的 剂。,一,还原,抗氧,维生素E中游离生育酚的检查时规定消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）不得过1.0ml，现硫酸铈滴定液的实际浓度为0.01053mol/L，应不得超过多少ml？A.0.95 B.0.97 C.0.99 D.0.92

23、 E.1.05,维生素C的含量测定(ChP 2010)取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。已知：取样量为0.2084g，消耗碘滴定液（0.09981mol/L）22.75ml。,要求：（1）解释划线部分（2）计算本品的含量是否符合规定（规定本品含C6H8O6应不低于99.0%）,VitB1片UV法含量测定 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于VitB1 25mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液(91000)约70ml，振摇15分钟，加盐酸溶液(91000)稀释至刻度。用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5.0ml，置另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液(91000)稀释至刻度，摇匀，在246nm处测定吸收度，按C12H17ClN4OSHCl的吸收系数（）为421计算，即得。,已知 20片重=1.4070g A246=0.461 取样量=0.1551g 规格=10mg/片求 本品含量是否符合药典规定？（应相当于标示量的90.0110.0%),