医院检验科钠离子及氯、钙的测定方法介绍.docx

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1、钠离子测定1.实验原理VitroS钠试剂是一种干燥，多层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份，用直接电位法进行钠离子测试的干片。该干片由两个离子选择电极组成，每一电极含有甲基莫能菌素（钠离子载体），一个参照层和一个银和氯化银层。将一滴IOul的患者样品和IOul的Vitros电解质参考液分别滴于干片左右两侧，于是两边的液体就向纸桥的中央移动，从而在参考电极和样品指示电极之间形成一条稳定的液流。每个电极会产生与其钠离子活性相应的电位，两极间的电位差与样品中钠离子浓度成正比。测定方式：电极电位法测试时间和温度：37C下约2分钟。2.标本：2.1病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰

2、。2.2样品类型：血清、肝素抗凝血浆；定时或随时采集的尿液。2.3标本采集与处理：2.3.1血清和血浆样品特别要注意的是：不要从正进行静脉注射的手臂上采血。纤维凝块会引起加样不完全，为避免此类情况发生，可以：让标本完全凝固后再离心取血清：观察血浆中是否有纤维凝块。样品采集后2天内要离心标本，吸出血清。处理样品时要将其当成生物污染品。2.3.2尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：不需加防腐剂，并且防腐剂可能会产生干扰。样品测试前要将其冷藏在2-8C。从冰箱中取出VitroS尿液电解质稀释液，放至室温，18-28C。轻轻将稀释液颠倒混匀（注意：不能摇晃）。在一个清洁、干燥的容器中加入一份

3、尿样和四份Vitros尿液电解质稀释液（稀释5倍）。迅速将稀释液盖好，放回冰箱。将样品与稀释液充分混匀。测试预处理后的样品，将测试结果乘以5,就得到原始尿样中的Na+浓度。处理样品时要将其当成生物污染品。3.标本的存放：血清、血浆：室温下可最多保存4天；冷藏最多1周：冷冻保存可保存长达半年。尿液样品在测试前要冷藏，保存在室温下最多1天：冷藏最多7天:冷冻保存可达半年。4.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。5.标本拒收的标准：氟化钠/草酸钠，EDTA或枸柳酸盐抗凝的血浆。加防腐剂或未冷藏的尿样。6.试验材料：6.1测试Na所需的物品包括：VitroS化学定标物Kit2；VitrO

4、S特制质控液；VitrOS参考液；VitroS尿液电解质稀释液。强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份是银，氯化银，氯化钠和甲基莫能菌素。其它成份有聚合物，增塑剂，稳定剂，缓冲剂，表面活性剂和集。干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.2试剂准备：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置120分钟，而冷臧的试剂盒至少要在室温下放置90分钟。去除内包装后立即将干片

5、盒放入仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。6.1.3试剂稳定性与贮存未开封的干片盒：存储在T8。C或低于该范围（为减少试剂预温时间或当冷冻空间有限时，也可将试剂盒在2-8C冷藏，最多保存三个月）.三在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过10天，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2小时；再次装载从仪器储臧器中取出的干片盒。如果储臧正确，VitrOSNa.干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参见VITROS250干化学分析仪试剂稳定性及贮存S0P文件。6.1.4变质

6、指示：超过有效期的试剂干片不能使用。6.1.5注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。6.2校准品：用VitroS化学定标物Kit2。血清、血浆、尿液都用相同的定标液，不过各自的SAVS值不同。有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITRoS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：使用Vitros特制的质控物品：若使用其它的一些质控物品，当与别的Na测试方法比较时就会出现差异。有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VlTROS50干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。7.仪器美国强生厂家VITR0S5

7、0全自动干式生化分析仪。具体测试程序请参阅操作手册的介绍。8.操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器5分后自动打印结果。具体测试程序请参阅VITRoS250操作手册.SOP。具体定标程序：用VitrOS化学定标物Kit2,定标液复溶后必须在1小时以内使用，以免PH值发生变化。参阅操作手册的相关章节内容。何时进行定标：在维护和保养时更换了仪器的重要部件。质控结果持续超出线性范围内时，详情参阅操作手册。管理条例上指定的时间，在美国，CLlA要求至少每6个月定标一次。说明:进行尿钠定标时，仪器会自动进行尿钾的定标。9.检验结果的判断与分析10.质量控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品

8、来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检杳与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控检测(IQCT)的内容。在每一批标本中都应把质控血清做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：以用VitroS化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。12.参考值范围血清/血浆137-145mmolL尿液30-90mmolLf40220mmol/day

9、以上参考范围值是通过测试59位健康成人，然后取靶值附近95%的结果计算所得。男性和女性的结果无明显差异。参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别.根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义：钠离子是细胞外液中的主要阳离子，人体内的钠平衡由肾脏维持。尿液排泄过多，腹泻，AddiSon氏综合症，肾小管肾炎等都可引起钠浓度降低。严重脱水，某些类型的脑外伤，糖尿病昏迷和盐摄入过量可导致钠浓度升高。14.操作性能14.1线性范围血清/血浆：75-250mmolL;尿液：5-25OnInIol/L(乘以稀释倍数5后的结果)。14.2精密度：在VitroS250生化仪上用质控液来

10、测精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。日间精密度血清X(mmolL)S(mmolL)CV(%)室间精密度n=20天X(mmolL)S(mmolL)CV(%)样品1n-801270.8样品11271.10.9样品2n=781471.0样品21471.51.0日间精密度尿液X(mmolL)S(mmolL)CV(%)室间精密度n=20天X(mmol/L)S(mmolL)CV(%)样品1n=74240,4样品1241.04.4样品2n=73.420.6样品2421.74.2*日间精密度是将2至3份相同的样品

11、在一天中运行两次，然后对测试结果进行统计计算。*室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进行统计计算。14.3方法学比较：用VitrOS700仪器和火焰光度参考方法分别测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示VitroS方法的准确度良好；用Vitros250仪器与Vitros700仪器测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示Vitros250方法的准确度良好，血清：Y=LO2X-1.64（r=0.998,N=89,检测范围1-219mmolL）；尿液：Y=1.03X+1.90（r=0.998,N=86,检测范围11l-213mmolL）14.4灵敏度：血清/血浆：75mmol/L

12、:尿液5mmol/L14.5特异性：经测试，以下物质对VitroSNa+干片法均无干扰（偏差安宁（安定药）2mg/dL、乐疾宁1.5mg/dL、苯巴比妥3mg/dL,苯妥因2mg/dL、水杨酸35mg/dL、磺胺噬哩6mg/dL、甲糖宁22mg/dL、甘油三酯800mg/dL、酪氨酸24mg/dL、尿素氮100mg/dL。14.6病人结果可报告范围血清/血浆：75-250mmol/L:尿液5-250mmolL（乘以稀释倍数5后的结果）。15.超出范围结果处理：本法线性上限血清/血浆：250mmol/L;血清或血浆：氯浓度一般不会超出系统的测试线性范围。VitroS干片法不能测试稀释后的样品，因

13、为稀释液会同时改变血浆液中的固体浓度和离子强度。16.病危报警值的处理当血清/血浆：氯2115mmol/L或W80mmol/L时，应在复查该标本检测结果后，报告上级检验医师（或科主任）后，及时报告临床医生，必要时可以再抽血更查。17.方法局限性17.1本法线性上限血清/血浆：250mmolL;氯浓度一般不会超出系统的测试线性范围。VitroS干片法不能测试稀释后的样品，因为稀释液会同时改变血浆液中的固体浓度和离子强度。17.2干扰物质：治疗性药物和软膏中的1克澳化物和碘化物分别会使结果产生大约3mmolL和4nnolL的偏差。正常生理水平的漠化物和碘化物对此法无干扰。有些药物和患者的自身状况也

14、会影响氯的测试值。一些文献中收集了有关于此的报道。18.补救措施：仪器出了故障可联系仪器厂家，进行紧急修理，如一时不能修好，如别的实验室有同类仪器可到别的仪器上先做，如别的实验室无同类仪器，可用本实验室的OLYMPUSISE分析仪或Easylyte电解质分析仪测定样品。19.参考文献强生厂家提供的方法学手册20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处理.SOP文件处理。钙的比色法测定1.实验原理Vitros钙试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。将一滴10Ul的患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。于是钙离子从附着的蛋白质上游离出来，透

15、过分布层进入下面的试剂层，与碑III染色剂生成有色复合物，使最大吸收峰发生改变。经过一段孵育期,有色复合物的反射强度可通过光谱法测定。所产生有色复合物的总量与样品中的钙含量是成正比的。测定方式：比色法波长：680nm测试时间和温度：37C下约5分钟。反应过程：pH5.6Ca+2+碑HI有色复合物2.标本采集2.1病人准备：无特殊要求。2.2样品类型：血清、肝素锂或钠抗凝血浆、定时或随时采集未加防腐剂的酸化尿液。2.3标本采集与处理：所有用于钙测试的样品，特别要注意一个问题：佩戴用碳酸钙粉制造的防护手套会在样品处理过程中造成污染（例如，吸管滴头，吸管，样品杯和杯盖），而这些被污染的消耗品在加样时

16、又会污染待测样品，从而使测试结果偏高。因此建议在拿这些消耗品时使用不含碳酸钙粉的手套，或者直接用干净的空手去拿，也可以用流水轻轻地冲洗有粉末的手套（不要用肥皂或任何类型的去污剂）然后再将其干燥后使用。说明：标有不含粉末的手套，在手套的里层也可能含有一些污染性粉剂。2.3.1血清和血浆样品卧床患者的结果会偏低3%；淤血的钙浓度会偏高15%o样品采集后2天内要离心标本，吸出血清。处理样品时要将其当成生物污染品。2.3.2尿液样品定时或随时采集未加防腐剂的酸化尿液。依照以下程序对测试钙的尿样进行酸化处理。注意：这一程序只用于患者的样品，质控标本不需如此处理。您可以将24h尿液全部或其中一部分进行酸化

17、。当尿液还有其它不需酸化的测试项目时，可以将部分尿液进行酸化。酸化全部尿液：收集尿液前将20mL6N的盐酸倒入收集尿液的容器内（随机收集的尿液中加ImL6N的盐酸）。如果收集前没有加盐酸，按照以上步骤酸化后，要将其放置至少Ih以后才能测试。酸化部分尿液：将全部尿液充分混匀后，吸出5mL。在5mL尿液中加IooUL6N的盐酸，然后充分混匀。确定样品的PH值在1.55.0之间，必要时进行调节。测试样品。注意：酸化后尿样的PH值要在L550之间，PH值低于1.5会产生一个负偏差。处理样品时要将其当成生物污染品。3.标本的存放：血清、血浆：如果测试时间拖延超过4小时，应将样品冷藏在2-8,-18C下冷

18、藏可长期保存。尿标本室温下最多5天，冷藏最多5周，-18。C以下冷冻可保存6个月。4.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。5.标本拒收的标准：采样管含EDT,氟化物，草酸或枸椽酸的样品，因为这些物质会与钙螯合而使结果产生负偏差。此外，接受EDTA治疗的患者血样也不能测试。6.试验材料：6.1测试Ca所需的物品包括：VitroS化学定标物Kit1；VitroS特制质控液；VitroS尿液酸化剂6N的盐酸。强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份是碑III染色剂。其它成份有染色物质，粘合剂，缓冲剂

19、，表面活性剂，交叉连接剂和媒染剂。干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.2试剂准备：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态1828Co因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置60分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。去除内包装后立即将干片盒放入仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。6.1.3试剂稳定性与贮俘未开封的干片盒：存储在2-8C或低于该范围。在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过4周，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不超过2个小

20、时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2小时；再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确，VitrosCa干片可保质到包装盒上标明的有效期限.参见VITROS250干化学分析仪试剂稳定性及贮存SOP文件。6.1.4变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。6.1.5注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒：不要让尖利物刺入内包装。6.2校准品：用VitrOS化学定标物Kit1。血清、血浆用相同的定标液，不过各自的SAVS值不同。有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参阅VlTROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP

21、文件。6.3质控品：使用VitrOS特制的质控物品；若使用其它的一些质控物品，当与别的Na测试方法比较时就会出现差异。如：用人血清/血浆混合物分离制成的质控物品，含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂的质控物品；含有或高或低总蛋白浓度的质控物品；乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使用。尿钙有专门的质控，由于不含未分解的钙而不需进行特别酸化处理。有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VlTRoS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。7.仪器：美国强生厂家VnROS250全自动干式生化分析仪。具体测试程序请参阅操作手册的介绍。8.操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器5分后

22、自动打印结果。具体测试程序请参阅VITROS250操作手册.SOP。具体定标程序：用Vitros化学定标物Kitl,定标液复溶后必须在1小时以内使用，以免PH值发生变化。参阅操作手册的相关章节内容。何时进行定标：在维护和保养时更换了仪器的重要部件。质控结果持续超出线性范围内时，详情参阅操作手册。管理条例上指定的时间，在美国，CLlA要求至少每6个月定标一次。说明：进行尿钙定标时，仪器会自动进行尿钾的定标。9.检验结果的判断与分析10.质量控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关性:其它详

23、情参阅操作手册质控章节的有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控检测(IQCT)的内容。在每一批标本中都应把质控血清做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程SOP文件。11.计算方法：以用VitroS化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。12.参考值范围血清/血浆2.10-2.55mmolL尿液：无钙饮食0.13-1.Ommol/天低于平均量钙饮食1.25-3.75mmol/天平均量钙饮食2.50-7.5OmnlOI/天参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同

24、而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义钙是骨骼中的主要矿物质成分，人体中99%的钙都存在于骨骼中。钙离子在传送神经冲动，维持正常的肌肉收缩方面起着非常重要的作用。人体中非正常的血钙浓度预示可能患有甲状腺功能失调，骨骼疾病，癌症，营养不良和吸收不良综合症，维生素D缺乏，过量摄入含钙的抗坏血酸以及肾脏疾病。14.操作性能14.1线性范围：血清/血浆：0.25-3.49mmol/L:尿液：0.25-4.44mmolL014.2精密度：在VitrOS250生化仪上用质控液来测精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样

25、品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。日间精密度血清X(mmo1/L)S(mmolL)CV(%)室间精密度n=20天X(mmolL)S(mmolL).CV(%)样品1r=782.30.02样品12.30.041.5样品2n=783.00.02样品23.00.041.3日间精密度尿液X(mmolL)S(mmolL)CV闾室间精密度：n=22天X(mmo1/L)S(mmolL).CV闾样品1n=881.40.02样品11.40.064.0样品2n=882.00.02样品22.00.084.3样品3n=842.80.03样品32.80.083.0样品4n-883.00.02样品43.00.082

26、.6*日间聚半密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对测试结果进行统计计算。*室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进行统计计算。14.3方法学比较：用Vitros700仪器和原子吸收分析法分别测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示VitrOS方法的准确度良好；用VitrOS250仪器与VitrOS700仪器测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示Vitros250方法的准确度良好，血清：Y=0.99X+0.2(r=0.999,N=72,检测范围0.85-3.49mmolL）;尿液:Y=l.02X-0.03（r=0.998,N=84,检测范围0.25-4.17mmo

27、lL）o14.4灵敏度：血清/血浆和尿液：0.25mmol/L。14.5特异性：经测试，以下物质对VitrOSCa干片法均无干扰（偏差0.2mmol/L）。阿司匹林30mg/Dl、对氨基水杨酸23mg/dL、胆红素20mg/dL、氯嘎嗪（利尿降压药）3mg/dL、环泡菌素20ug/mL、葡聚糖IoOOmgdL、乙醇300mgdL、龙胆酸0.5mgdL、血红蛋白150mg/dL、镁4.32mgdL钠156mg/dL、甘油三酯800mg/dL、尿素氮100mgdL14.6病人结果可报告范围：血清/血浆：0.25-3.49mmol/L:尿液：0.25-4.44mmolLo15.超出范围结果处理：如样

28、品中的钙浓度血清/血浆：3.49InmOl/L；尿液：4.44InmoI/L超出该范围，请按下列步骤进行稀释:血清或血浆：用等量试剂级别的水或生理盐水稀释样品，重新测试，将测试结果乘以2,就得到原始样品中钙的浓度。尿液：用等量试剂级别的水稀释样品，重新测试，将测试结果乘以2,就得到原始样品中钙浓度。16.病危报警值的处理当血清钙测定值3.5nol/L或1.6mmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。17.方法局限性17.1本法线性上限血清/血浆3.49mmol/L,尿液均为4.44mmolLs如果样品中的钙浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释:血清或血浆：

29、用等量试剂级别的水或生理盐水稀释样品，重新测试，将测试结果乘以2,就得到原始样品中钙的浓度。尿液：用等量试剂级别的水稀释样品，重新测试，将测试结果乘以2,就得到原始样品中钙的浓度。17.2干扰物质：血清：服用泛影钠患者的血样不能用此法测钙，舒拉明（抗寄生虫药物）浓度达300ug/mL时，会使钙结果产生-10%的偏差。尿液：冰醋酸IOmL/L分析物浓度钙浓度为3.5mmol/L时，产生-0.3mmol/L的干扰；浓缩氢氯酸IomL/L分析物浓度钙浓度为2.9mmol/L时，产生-0.45InmoI/L的干扰；枸橡酸IOmL/L分析物浓度钙浓度为1.8mmol/L时，产生-0.2mmol/L的干扰

30、:麝香草酚IOmL/L分析物浓度钙浓度为2.5mmol/L时，产生-0.Immol/L的干扰。不加盖的样品杯放在室温下，由于二氧化碳丢失而使样品的pH值升高，会使钙的测试结果最多偏高0.4mg/dL(0.lmmolL)o为减少此类误差，可在厌氧环境下处理样品并尽快测试，这种情况对量少的小儿样品尤其重要。有些药物和患者的自身状况也会影响钙的测试值。18.补救措施：仪器出了故障可联系仪器厂家，进行紧急修理，如一时不能修好，可用本实验室的OLYMPUSAUlOoo分析仪测定样品。19.参考文献强生厂家提供的方法学手册20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处理.SOP文件处理。